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实验所用产品

产品货号	产品名称
40192ES	基质胶 Ceturegel® Matrix,Phenol Red-Free,LDEV-Free Plus(同康宁matrigel胶)

 

1. 样本制备

在无菌条件下，通过显微手术摘取小鼠肝脏组织。

2. 样本消化

将肝脏组织转移至离心管中，加入适量预热的小鼠正常肝原代组织消化液。消化液体积应为组织体积的3-5倍。随后，将离心管置于37℃条件下消化10-15分钟，直至组织被解离为单细胞悬液。

3. 样本清洗

将消化后的细胞悬液通过适当孔径的细胞筛网过滤，以去除未消化的组织碎片。然后，用预冷的类器官专用清洗液（或基础培养基）对过滤后的细胞悬液进行洗涤，离心后弃上清。此过程重复数次，以获得高纯度、高活性的单细胞沉淀。

4. 混合物形成

在冰上操作。估计并记录第3步获得的细胞沉淀的近似体积。按照细胞沉淀体积的25倍，计算并加入预冷的Ceturegel®基质胶，轻柔吹打以重悬细胞，形成均一的细胞-基质胶混合悬液。

5. 铺板

将混合悬液种植于24孔板各孔底部中央，每孔点胶25 μL。将培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中孵育10-15分钟，使基质胶完全凝固。

6. 培养

待基质胶凝固后，沿孔壁缓慢加入已恢复至室温的小鼠正常肝类器官培养基，每孔添加500-750 μL，确保胶滴被完全浸没。将培养板放回培养箱中开始培养。

7. 后续维持

根据培养基说明书或常规类器官培养经验，定期更换新鲜培养基，并在显微镜下观察类器官的形成（通常需要3-7天）与生长状态。

图1：Day3培养情况	图2：Day7培养情况	图3：Day11培养情况

（数据来源：中山大学附属第一医院）

 

类器官构建实验小贴士

1.样本处理：无菌操作，快速剔除坏死组织，保持样本低温，确保起始细胞活性。

2.消化过程：严格控制消化液浓度、温度与时间，通过镜检及时终止，避免过度消化。

3.基质胶操作：全程冰上操作，快速重悬与铺板，防止胶体凝固，确保点胶位置居中。

4.培养维持：使用新鲜培养基，定期轻柔换液，保持培养环境稳定，勤于镜检观察形态。

 

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