细胞侵袭 | 大鼠骨肉瘤(UMR106)细胞侵袭实验案例
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2026-02-05
实验所用产品：
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40183ES |
一、Transwell小室基底膜制备
基质胶解冻与稀释：将Ceturegel®基质胶置于冰上，于4°C完全融化，所有操作在冰上进行。用预冷的无血清培养基按 1:1 比例进行稀释（注：此比例下基质胶终浓度较高，约4.5-5 mg/mL，适用于侵袭能力较强的细胞或需要更厚屏障的模型）。
铺胶：选用 8 µm孔径 的Transwell小室。用预冷的枪头吸取 50 µL 稀释好的基质胶，垂直、缓慢地加至小室聚碳酸酯膜中央，轻轻晃动或水平摇动小室，使胶均匀覆盖整个膜面，注意避免产生气泡。
凝胶化：将铺胶后的小室置于24孔板板架中，放入37°C培养箱，静置 1-2小时，使基质胶完全凝固形成模拟的ECM层。
二、实验细胞准备
细胞消化与收集：吸弃培养UMR-106细胞的旧培养基，用无菌PBS轻柔清洗一次。加入适量胰酶消化细胞，当细胞变圆脱落后，加入含血清的完全培养基或等体积的无血清培养基终止消化。
细胞悬液制备：将细胞悬液转移至离心管，离心后弃上清。用PBS重悬并轻柔洗涤细胞1次，以去除残留的胰酶和血清。最后，用无血清培养基重悬细胞，并使用细胞计数板将密度精确调整至 1×10⁵个/mL。
三、细胞接种与共培养
建立趋化梯度：在24孔板的下室加入 600 µL（标准建议量，以确保与小室底部充分接触）含 10% FBS或其他特定化学引诱剂 的完全培养基作为趋化源。
接种细胞：取制备好的细胞悬液 200 µL（即约2×10⁴个细胞），小心加入已包被基质胶的Transwell小室的上室。操作时应避免枪头触碰已凝固的胶层或产生气泡。
孵育培养：将组装好的培养板小心移至37°C、5% CO₂培养箱中，孵育24小时。
四、培养后处理、染色与结果分析
固定：孵育结束后，取出Transwell小室。用无菌PBS轻轻清洗上室内部一次，以去除未粘附的细胞。将小室放入盛有 4%多聚甲醛（或其他合适固定液）的孔中，室温固定 10-15分钟。
清洗与染色：固定后，用PBS清洗小室两次。使用 0.1%结晶紫溶液（或其他核染料）对细胞进行染色，室温染色 15-20分钟。
漂洗：染色后，用PBS轻柔漂洗小室数次，直至洗脱液无色。
注意：用湿润的棉签，非常轻柔地擦拭上室膜的表面（即基质胶面），以彻底擦除未发生侵袭的细胞。此步骤需谨慎操作，避免破坏已穿透至膜下表面的细胞。
细胞计数与数据分析：
将小室室温晾干或直接置于光学显微镜下观察。随机选择至少5个不同的视野，对下室膜上的侵袭细胞进行拍照。计数每个视野中的侵袭细胞数，并计算各组（如处理组与对照组）的平均值。
实验结果：与对照组相比，处理组穿膜细胞数增多。表明该处理方式对UMR-106细胞侵袭有促进作用。
| 图1：对照组 | 图2：处理组 |
（数据来源：南京中医药大学）
细胞侵袭实验小贴士
1.铺胶：基质胶铺制需全程冰上操作，枪头、离心管等耗材应提前预冷，以防胶体在操作过程中提前聚合，导致铺胶不均，影响屏障均一性。
2. 细胞：细胞需经充分无血清饥饿，以消除血清背景干扰。接种密度应通过预实验精确优化。
3. 气泡：组装小室与培养板时，务必检查并确保小室底部膜与下室含趋化剂的培养液之间无气泡。
4. 培养：侵袭培养时间因细胞类型而异，需通过预实验确定（通常12-48小时）。
5. 擦拭：用棉签擦拭上室未侵袭细胞时，动作必须轻柔、一致，且仅擦拭一次。
6. 计数：应在显微镜下随机选择至少5个不重叠的视野（避开膜边缘区域）进行计数，取平均值。
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