细胞侵袭 | 小鼠结肠癌(CT26)细胞侵袭实验案例
18886
2026-02-05
实验所用产品：
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40183ES |
一、Transwell小室基底膜制备
基质胶准备：将基质胶提前一晚从-20°C放置于冰上，转移至4°C冰箱，过夜融化。实验前，将所需的枪头、EP管等一并预冷。
铺胶与凝胶化：全程在冰上操作。用预冷的无血清培养基将融化的Ceturegel®基质胶按 1:8 比例稀释并混匀。立即吸取 80 μL 稀释液，均匀铺于Transwell小室的聚碳酸酯膜表面。将小室置于37°C培养箱中，孵育 2小时，使基质胶完全凝固形成薄膜。
基底膜水化：向已凝固基质胶的小室上室加入 200 μL 无血清培养基，于37°C培养箱中水化 30分钟。使用前小心吸弃培养基。
二、实验细胞准备与处理
细胞饥饿：取对数生长期的CT26细胞，用无血清培养基饥饿处理 12小时。
细胞悬液制备：消化细胞，离心（1000 rpm，3分钟）收集，用PBS洗涤一次。用无血清培养基重悬细胞，并调整密度至 1.5×10⁵个/mL。
三、细胞接种与共培养
接种细胞：吸弃小室上室中水化后多余的液体。取 400 μL 细胞悬液（即含 6×10⁴个细胞）加入Transwell小室的上室。
建立趋化梯度与处理：在24孔板的下室中，
对照组：加入 600 μL 含 10% FBS 的完全培养基。
药物组：加入 600 μL 含 相应浓度药物的培养基。
注意：操作时需避免在下室与小室底部间产生气泡。
孵育培养：将培养板置于37°C、5% CO₂培养箱中，常规培养 24小时。
四、固定、染色与结果分析
固定：培养结束后，取出小室。用湿润的棉签，非常轻柔地擦拭上室，以彻底去除未侵袭的细胞及基质胶。用 4% 多聚甲醛 固定细胞 20分钟。
染色与清洗：弃去固定液，用 1% 结晶紫染色液 染色 20分钟。染色后，用超纯水轻柔清洗小室数次，以去除多余染料。
细胞计数与数据分析：将小室晾干后，置于显微镜下观察。随机选择5个视野，对穿透至膜下侧（底面）并贴附的细胞进行拍照和计数，计算各组平均值。
实验结果：与对照组相比，药物处理组的穿膜细胞数显著减少，表明该药物能对CT26细胞侵袭有抑制作用。
| 图1：对照组 | 图2：实验组 |
（数据来源：福建中医药大学）
细胞侵袭实验小贴士
1.铺胶：基质胶铺制需全程冰上操作，枪头、离心管等耗材应提前预冷，以防胶体在操作过程中提前聚合，导致铺胶不均，影响屏障均一性。
2. 细胞：细胞需经充分无血清饥饿，以消除血清背景干扰。接种密度应通过预实验精确优化。
3. 气泡：组装小室与培养板时，务必检查并确保小室底部膜与下室含趋化剂的培养液之间无气泡。
4. 培养：侵袭培养时间因细胞类型而异，需通过预实验确定（通常12-48小时）。
5. 擦拭：用棉签擦拭上室未侵袭细胞时，动作必须轻柔、一致，且仅擦拭一次。
6. 计数：应在显微镜下随机选择至少5个不重叠的视野（避开膜边缘区域）进行计数，取平均值。
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