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实验所用产品

产品货号	产品名称
40192ES	基质胶 Ceturegel® Matrix,Phenol Red-Free,LDEV-Free Plus(同康宁matrigel胶)

 

1.样本制备

获取子宫内膜活检样本，于无菌条件下操作。

2.样本清洗

使用预冷的PBS缓冲液冲洗活检组织样本，直至冲洗液澄清。样本重量约为1g。

3.样本处理

将清洗后的子宫内膜组织置于培养皿中，使用无菌手术剪将其剪碎成约1 mm³大小的组织块。

4.样本消化

向组织碎片中加入适量的胶原酶消化液，置于37℃恒温水浴摇床或培养箱中消化15-30分钟。

5.洗涤

消化结束后，加入含有1% FBS的DMEM/F12完全培养基以终止消化。随后将消化混合物离心（具体转速与时间可根据常规细胞离心条件设定，例如300-500 g，5分钟），弃去上清以去除胶原酶及终止液。

6.收集细胞悬液

用适量培养基重悬细胞沉淀，将悬液依次通过100 μm和40 μm细胞滤网进行过滤。首先经100 μm滤网过滤以除去未消化的组织块，随后将滤液再经40 μm滤网过滤。停留在40 μm滤网上的细胞团即为所需的腺体上皮细胞团。

7.洗涤

用适量的类器官基础培养基小心冲洗40 μm滤网背面，以收集滤网上的腺体上皮细胞团。将收集的细胞悬液离心（例如300-500 g，5分钟），弃去上清。

8.混合物形成

使用预冷的、含有5%Ceturegel®基质胶的培养基重悬腺体上皮细胞团沉淀。根据细胞沉淀量，按1:3的比例（沉淀体积：基质胶培养基体积）配制混合悬液，并置于冰上备用。

9.铺板

将混合悬液种植于24孔板底部中央，每孔加入30 μL。避免悬液触及孔板侧壁。将培养板置于37℃、5% CO₂培养箱中孵育约30分钟，使基质胶完全凝固。

10.培养

待Ceturegel®基质胶凝固后，沿孔壁缓慢加入已配制好的子宫内膜类器官专用生长培养基，每孔800 μL，确保胶滴被完全浸没。将培养板放回37℃、5% CO₂培养箱中培养。每隔2天更换一次新鲜培养基，并观察类器官生长状态。通常，子宫内膜类器官在3-5天内可形成。

 

 

（数据来源：中山大学附属第一医院）

 

类器官构建实验小贴士

1.样本处理：无菌操作，快速剔除坏死组织，保持样本低温，确保起始细胞活性。

2.消化过程：严格控制消化液浓度、温度与时间，通过镜检及时终止，避免过度消化。

3.基质胶操作：全程冰上操作，快速重悬与铺板，防止胶体凝固，确保点胶位置居中。

4.培养维持：使用新鲜培养基，定期轻柔换液，保持培养环境稳定，勤于镜检观察形态。

 

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