血管生成实验案例二
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2026-02-05
实验所用产品
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产品货号 |
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40186ES |
一、实验前准备与基质胶铺板
材料准备：准备好实验所需材料，包括Ceturegel®基质胶、24孔板、HUVEC细胞、以及预冷的枪头和EP管。
全程低温操作：实验开始前，将Ceturegel®基质胶放置于装有碎冰的冰盒中，于4℃冰箱过夜解冻。将融化的基质胶、预冷的24孔板及枪头始终置于冰盒上操作，以延缓基质胶凝固。
铺板与聚合：使用预冷的枪头，向24孔板每孔中央加入 50 µL 基质胶原液。手持孔板在冰上水平轻轻晃动，使胶自然铺满孔底，注意避免产生气泡。将铺胶后的24孔板转移至37℃培养箱中，静置 30–45分钟，使其完全凝固成凝胶。
二、HUVEC细胞准备、高糖建模与接种
高糖损伤建模：
待HUVEC细胞贴壁后，开始建立高糖损伤模型。
处理组：使用在DMEM（低糖型）基础上额外添加葡萄糖的培养基，使其终浓度为 6 g/L，预处理细胞 48小时。
对照组：使用常规的DMEM（低糖型）培养基培养。
细胞消化与重悬：建模结束后，消化两组细胞，离心后获得细胞沉淀。用相应组别的培养基（高糖或对照）重悬细胞，并进行精确计数。
细胞接种：调整细胞密度，以每孔 500 µL 培养基的体积，接种 1.5×10⁵个 细胞（即15万细胞/孔）于已凝固的基质胶上。此密度可使细胞在成管初期达到较高的接触概率。接种后，手持孔板轻轻进行前后左右的“十”字晃动，使细胞分布均匀。
三、培养、观察与表型记录
孵育：将接种细胞的24孔板置于37℃、5% CO₂培养箱中培养。
动态观察与记录：从接种后 3小时 开始，在倒置显微镜下定期观察。通常 4小时 左右可见明显的管状结构形成。应在4小时这个关键时间点系统性地进行拍照记录。应对比观察并描述高糖组与对照组在成管速度、网络复杂度和完整性上的差异。
四、实验结果
结果说明：通过对比分析，验证了“高糖会损害内皮细胞管状结构形成”的实验结论。
| 图1：对照组 | 图2：处理组 |
（数据来源：瑞金医院）
血管生成实验小贴士
细胞状态：推荐使用3-5代细胞，可进行血清饥饿同步化；
基质胶：全程冰上操作，铺胶轻柔均匀；
细胞接种：使用单细胞悬液，并精确计数，轻柔加样；
观察：建议通过预实验确定最佳观察时间点，以捕获网络成熟期。
