血管生成实验案例一
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2026-02-05
实验所用产品
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产品货号 |
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40186ES |
一、实验前准备与基质胶铺板
基质胶解冻：实验前，将Ceturegel®基质胶放置于装有碎冰的冰盒中，于4℃冰箱过夜解冻。
全程低温操作：实验开始后，所有涉及基质胶的步骤需在冰上操作。将预冷的24孔板、枪头及融化的基质胶置于冰盒中。
铺板与聚合：使用预冷的枪头，向预冷的24孔板每孔中加入 250 µL 融化的基质胶原液。轻轻晃动孔板使胶铺匀，避免产生气泡。将铺胶后的24孔板转移至37℃培养箱中，静置 30分钟至1小时，使其充分凝固成凝胶。
二、HUVEC准备与接种
细胞状态：使用生长状态良好的第3代HUVEC细胞，待其融合度达到约80% 时进行处理。
细胞消化：吸弃旧培养基，用PBS轻柔润洗细胞2-3次。加入适量0.25%胰酶进行消化，待细胞变圆后，用完全培养基终止消化，吹打成单细胞悬液。
细胞收集与计数：将细胞悬液收集至离心管，以 800 rpm 离心5分钟。弃去上清，加入1 mL新鲜完全培养基重悬细胞。取10 µL细胞悬液与90 µL培养基混合稀释后，进行细胞计数。
细胞悬液制备与接种：根据计数结果，用完全培养基制备细胞悬液，调整密度使每孔接种1.0×10⁵个细胞（即10万细胞/孔）。待基质胶完全凝固后，小心吸弃孔内可能存在的液体。缓慢地将配制好的细胞悬液加至凝胶表面。建议每个条件设置至少3个复孔。
三、培养、观察与表型记录
孵育：将接种细胞的24孔板置于37℃、5% CO₂ 培养箱中培养。
动态观察：从接种后开始，每隔2小时在倒置显微镜下观察一次。详细记录细胞贴壁伸展、线性连接及形成封闭网状结构（标志血管腔样结构成熟）等关键形态学变化的时间点。
图：8h培养情况
（数据来源：安徽医科大学）
血管生成实验小贴士
细胞状态：推荐使用3-5代细胞，可进行血清饥饿同步化；
基质胶：全程冰上操作，铺胶轻柔均匀；
细胞接种：使用单细胞悬液，并精确计数，轻柔加样；
观察：建议通过预实验确定最佳观察时间点，以捕获网络成熟期。
