皮下成瘤 | 小鼠肺癌(LLC细胞系)原位移植瘤模型构建案例
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2026-02-04
实验所用产品：
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40183ES |
一、细胞准备与悬液制备
细胞培养：使用小鼠肺癌细胞系LLC，确保细胞处于对数生长期，状态良好。
细胞收集与清洗：使用胰酶消化收集细胞，用含血清培养基中和后离心。细胞沉淀用预冷的PBS清洗1-2次，以去除残留血清。
细胞计数与重悬：进行精确细胞计数。根据实验设计每只小鼠注射2×10⁵个细胞，用预冷的PBS将细胞重悬至目标浓度。
二、细胞-基质胶混合物的制备
低温操作：所有操作需在冰上进行，以防止基质胶凝固。
等比例混合：将上述配制好的细胞悬液与预冷的Ceturegel®基质胶按 1:1的体积比 在预冷的离心管中轻轻混匀，确保混合均匀且无气泡。
保持低温待用：混合完成后，将混合物立即置于冰上，并应在30分钟内用于接种，以保持细胞活性和基质胶流动性。
三、小鼠原位接种手术操作
动物麻醉：
将小鼠放入麻醉诱导盒，开启麻醉机。
设置诱导参数：调节异氟烷浓度至2.5%-3%，氧气流量至3 L/min。约2-3分钟后小鼠进入深度麻醉状态。
将小鼠移出，置于手术台，用面罩维持麻醉。调整维持参数：异氟烷浓度至1%左右，氧气流量0.5-1 L/min。
固定与消毒：将小鼠右侧卧固定于操作台。使用75%乙醇和碘伏对左前肢腋下至肋骨下缘区域进行交替消毒。
开胸与原位注射：
使用无菌手术器械，沿左侧肋缘切开皮肤及肌肉层，暴露第3、4肋骨。
用微量注射器（如Hamilton注射器）吸取20 µL冰上保存的细胞-基质胶混合物。
于第3、4肋骨之间，将针头垂直刺入肺组织约3 mm深度。
缓慢、稳定地推注全部悬液。
术后处理：
注射完毕后，缓慢退出针头，并短暂用无菌棉签轻压穿刺点，观察有无液体漏出。使用可吸收缝合线逐层缝合肌肉与皮肤切口，再次用碘伏消毒创口，将小鼠转移至温暖、清洁的笼盒中，密切监护直至其完全苏醒，并观察术后状态。
四、实验结果
构建肺癌原位移植模型后，注射D-Luciferin底物后10-15分钟，使用IVIS等成像系统检测生物发光信号，定量评估肿瘤负荷情况。从活体成像结果看，成瘤集中，且信号较强，说明瘤体生长情况良好。
图3：小鼠活体成像（数据来源：中国药科大学）
皮下成瘤实验小贴士
细胞状态优先：确保使用处于对数生长期、活性高（>95%）的细胞。接种前进行准确的细胞计数，并尽量缩短细胞在冰上或悬液状态下的等待时间，以维持最佳活力。
严格低温操作：基质胶在4℃以上会迅速聚合。所有涉及基质胶的步骤（液化、分装、混合）务必在冰上完成，注射器也应预冷，这是防止混合物在针头内凝固、保证注射顺畅的关键。
注射技巧：进行皮下注射时，针头刺入皮肤后应平行于体表推进一小段，形成“隧道”后再缓慢推液。注射后可轻压针孔片刻，能有效防止细胞悬液渗出，确保接种量的准确。
规范监测：待肿瘤可触及后，建议由同一操作者定期、轻柔地使用游标卡尺测量。记录肿瘤的最长径和与之垂直的最短径，并采用统一公式计算体积，以减少人为误差，获得可靠的生长曲线。
