皮下成瘤 | 小鼠乳腺癌(MCF7细胞系)原位移植瘤模型构建案例
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2026-02-04
实验所用产品
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产品名称 |
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40183ES |
一、细胞准备与悬液制备
细胞培养与状态：使用处于对数生长期、活力 > 95% 的人乳腺癌细胞系MCF7。为便于后续活体成像，选用稳定表达荧光素酶或荧光蛋白的细胞株。
细胞收集与清洗：使用胰酶消化细胞，用含血清培养基终止消化。将细胞悬液离心，沉淀用无菌预冷的 PBS 或 HBSS 清洗两次，以彻底去除血清和胰酶。
细胞计数与重悬：使用细胞计数板或计数仪对细胞进行精确计数。根据目标细胞注射量（ 1×10^6 个细胞/只 ）和计划注射小鼠数量，计算所需总细胞数（通常额外多备10-20%）。将细胞沉淀用预冷的无血清培养基、PBS或HBSS重悬至目标浓度。
二、细胞-基质胶混合物的制备
低温操作：所有步骤必须在冰上操作，防止基质胶凝固。
试剂准备：使用前将Ceturegel®基质胶于 4℃冰箱 中过夜缓慢融化，并始终保持低温。
等比例混合：根据预定注射体积（ 50 µL/只 ）和基质胶比例（通常为 1:1 体积比），计算所需的细胞悬液体积与基质胶体积。
混合操作：将计算好体积的预冷细胞悬液，缓慢加入等体积预冷的基质胶中。用预冷的移液器枪头轻轻吹打混匀，务必避免产生气泡。混合完成后，立即将混合物置于冰上备用，在30分钟内完成注射。
三、免疫缺陷鼠原位（乳腺脂肪垫）接种操作
动物准备：使用 4-6周龄雌性 免疫缺陷小鼠，在SPF级屏障环境中饲养。
麻醉与固定：使用吸入式异氟烷（推荐）或注射式麻醉剂对小鼠进行麻醉后，将小鼠仰卧位固定于操作台。
定位与备皮：
定位：确定第4对（腹股沟）乳腺脂肪垫，位于后肢基部附近。
备皮消毒：使用脱毛膏或剃毛器去除注射区域的毛发。用酒精棉片和碘伏交替消毒皮肤3次。
注射操作：
吸取样品：注射前再次轻轻混匀冰上的细胞-基质胶混合物。
经皮注射：用镊子轻轻提起第4对乳头旁皮肤。从乳头侧方约2-3 mm处进针，平行于体表刺入并深入至乳腺脂肪垫中心，缓慢推注。可见皮下形成凝胶状隆起。
术后护理：将小鼠转移至清洁笼盒，置于加热垫上直至完全苏醒。
四、实验结果
成瘤后腹腔注射D-Luciferin底物后10-15分钟，使用IVIS等成像系统检测生物发光信号，定量评估肿瘤负荷情况。从活体成像结果看，成瘤集中，且信号较强，说明瘤体生长情况良好。
图：小鼠活体成像（数据来源：北京大学）
皮下成瘤实验小贴士
细胞状态优先：确保使用处于对数生长期、活性高（>95%）的细胞。接种前进行准确的细胞计数，并尽量缩短细胞在冰上或悬液状态下的等待时间，以维
最佳活力。
严格低温操作：基质胶在4℃以上会迅速聚合。所有涉及基质胶的步骤（液化、分装、混合）务必在冰上完成，注射器也应预冷，这是防止混合物在针头内凝固、保证注射顺畅的关键。
注射技巧：进行皮下注射时，针头刺入皮肤后应平行于体表推进一小段，形成“隧道”后再缓慢推液。注射后可轻压针孔片刻，能有效防止细胞悬液渗出，确保接种量的准确。
规范监测：待肿瘤可触及后，建议由同一操作者定期、轻柔地使用游标卡尺测量。记录肿瘤的最长径和与之垂直的最短径，并采用统一公式计算体积，以减少人为误差，获得可靠的生长曲线。
