MM培养基配制方案
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2026-07-24
最小甲醇基础培养基Minimal Methanol Medium（MM）是甲醇诱导型酵母表达体系中常用的诱导培养基之一，广泛应用于毕赤酵母重组蛋白表达、甲醇诱导启动子功能验证、目的蛋白表达条件优化及甲醇利用表型相关实验。其核心原理是以甲醇作为主要碳源，同时作为甲醇诱导型启动子（如AOX1启动子）的诱导因子，激活目的基因表达，使酵母细胞在特定培养条件下启动重组蛋白合成。与MG/MGY等甘油培养基不同，MM 培养基更侧重于诱导阶段的目的蛋白表达；与YPD等复合培养基相比，MM 培养基具有成分明确、背景可控、诱导逻辑清晰、实验重复性强等特点，尤其适用于对表达诱导条件、蛋白表达水平和实验可重复性要求较高的酵母表达实验。
永利3044集团官网围绕酵母MM培养基配制场景，提供从YNB、琼脂、硫酸铵补充试剂、无菌去离子水到相关耗材的配套产品组合。依托优质原料、精准配比、严格生产质控和稳定批次表现等优点，相关产品已被多篇高水平科研论文采用。您可参考永利3044集团官网配套方案快速完成MM培养基的标准化配制，减少多品牌混配带来的批次差异、组分不匹配和操作误差，提升酵母甲醇诱导表达实验的稳定性、重复性和结果可靠性。最小甲醇基础培养基Minimal Methanol Medium（MM）
Minimal（最小/基础）：仅保留酵母生长必需的无机盐、维生素、无机氮源、碳源，不含任何游离氨基酸、腺嘌呤、尿嘧啶，营养组分极简、明确、无冗余。
Methanol（甲醇）：甲醇作为此培养基唯一碳源；
核心设计目的：最小甲醇基础培养基（MM）以甲醇为唯一碳源，搭配无氨基酸、无复合营养的极简YNB基础体系。一方面依靠缺失组氨酸等营养构建筛选压力，可对携带 his4、ade2 标记的毕赤酵母缺陷株完成阳性转化子筛选，适配GS115、X33、KM71、SMD1168、PichiaPink 等主流菌株；另一方面甲醇可特异性激活AOX1诱导启动子，用于外源蛋白诱导表达；同时可与MD培养基配合使用，依托菌株甲醇代谢生长差异完成 Mut⁺/Mutˢ甲醇利用表型鉴定，集筛选、分型、诱导表达三种功能于一体。
液体培养基配制：
1. 用1000 mL无菌去离子水溶解以下MM培养基配方，搅拌至完全溶解。
MM培养基配方：5 mL 甲醇、13.4g不含氨基酸YNB（60901ES）、0.4 mg D-生物素（60338ES）
注：可以提前配制500×生物素母液（200 mg/100 mL），每升培养基加0.05 mL母液替代直接称取微量粉末，减少误差。
2. 0.22 μm（84309ES）过滤除菌。
固体培养基配制：
1. 用500 mL无菌去离子水（60168ES）溶解以下MM培养基配方，搅拌至完全溶解。
MM培养基配方：5 mL 甲醇、13.4g不含氨基酸YNB（60901ES）、0.4 mg D-生物素（60338ES）
2. 0.22 μm孔径滤器（84309ES）过滤除菌并保持70℃恒温备用（A液体）
3. 用500 mL无菌去离子水（60168ES）溶解20 g琼脂粉（B液体）
4. 高压灭菌后70℃水浴备用，AB液体按照1:1充分混合后倒平板
5. 室温凝固后4℃避光保存
1. 甲醇高温易分解、挥发，严禁高温灭菌，必须待水溶液冷却后添加或过滤除菌。
2. 长期培养需定期补加甲醇维持诱导
Q1: 为什么MM培养基中要使用甲醇？
A1: 甲醇在毕赤酵母表达系统中具有双重作用：1.甲醇可以作为酵母可利用的碳源；2.甲醇可以诱导甲醇响应型启动子，例如AOX1启动子，从而启动目的基因表达。
Q2: MM和MG/MGY培养基有什么区别？
A2: MM培养基碳源为甲醇，用于诱导目的蛋白表达；MG/MGY培养基为甘油，用于诱导前菌体扩增。通常实验流程是：
先用MG/MGY培养菌体，使菌体达到较好的生长状态，再收集菌体并转入MM中，用甲醇诱导目的蛋白表达。
Q3: MM可以用于菌体快速扩增吗？
A3: 一般不建议。甲醇作为碳源时，酵母生长速度通常慢于甘油或葡萄糖。因此，MM更适合用于诱导表达，不适合作为前期快速扩增培养基。
Q4: 甲醇浓度越高，蛋白表达量越高吗？
A4: 不一定。甲醇浓度过低可能诱导不足；但甲醇浓度过高会对细胞产生毒性，导致菌体生长受抑、细胞死亡增加，反而降低蛋白表达量。因此，甲醇诱导需要控制在合适范围内，并根据目的蛋白表达情况进行优化。
Q4: MM培养基诱导表达效果不好，可能是什么原因？
A4: 常见原因包括：菌株构建或插入片段异常；启动子或表达框设计问题；诱导前菌体状态不好；起始菌体密度不合适；甲醇浓度过低或过高；补加甲醇不及时；诱导温度不合适；诱导时间过短或过长；目的蛋白本身难表达、易降解或有毒性；分泌表达时信号肽效率不足；培养基中关键组分缺失，例如生物素不足。
建议从菌株验证、甲醇浓度、诱导温度、诱导时间、取样时间点和表达检测方法几个方面逐步排查。
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产品货号 |
产品名称 |
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Yeast Nitrogen base 酵母氮源基础 |
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D(+)-Glucose,anhydrous D(+)-无水葡萄糖 |
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Agar琼脂粉 |
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Ammoniumsulphate,≥99.0%,AR硫酸铵,≥99.0%,AR |
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SterileDeionizedWater(PCRGrade)无菌去离子水(PCR级) |
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DistilledWater蒸馏水 |
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针头式过滤器，0.22µm，PES，25mm，灭菌 |
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培养基全称 |
适用菌株/实验场景 |
培养基制备方案 |
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Synthetic Dropout Medium 合成缺陷培养基（SD） |
酵母单/双杂交实验、基因互补实验，用于单质粒转化验证、共转化验证、蛋白互作功能初筛等 |
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Regeneration Dextrose Medium 再生葡萄糖培养基（RD） |
毕赤酵母原生质体转化实验，用于原生质体复苏再生、转化子选择性培养、阳性转化单克隆分离筛选 |
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Minimal Dextrose Medium 最小葡萄糖基础培养基（MD） |
毕赤酵母表达菌株构建、转化子初筛、表型鉴定、菌株保藏，适配 GS115、X33 等多种常用毕赤酵母菌株 |
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Minimal Glycerol Medium 最小甘油基础培养基（MG/MGY） |
毕赤酵母重组菌株种子液活化与富集、诱导前菌体大量增殖，为后续蛋白诱导表达准备高活性菌体 |
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Minimal Methanol Medium 最小甲醇基础培养基（MM） |
毕赤酵母外源蛋白诱导表达、Mut表型鉴定、缺陷型菌株转化子筛选，适配多种常用毕赤酵母菌株 |
细菌培养相关专题详见官网：
