RD培养基配制方案
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2026-07-24
再生葡萄糖培养基Regeneration Dextrose Medium（RD）是酵母遗传转化实验中常用的恢复型培养基之一，主要应用于酵母原生质体转化、电转化或化学转化后的细胞恢复、细胞壁再生及转化子菌落形成。其核心作用是通过葡萄糖提供易利用碳源，并配合适宜的营养条件与渗透压环境，帮助经历转化处理后的酵母细胞缓解应激损伤、恢复代谢活性、完成细胞壁重建，从而提高转化后细胞存活率和阳性克隆形成效率。与MD、SD等偏筛选型培养基不同，RD培养基更侧重于“恢复与再生”，是酵母转化流程中连接“转化处理”与“后续筛选”的关键过渡培养体系，尤其适用于对转化效率、细胞恢复状态和菌落形成质量要求较高的酵母遗传操作实验。
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再生葡萄糖培养基RegenerationDextroseMedium（RD）
Regeneration：添加高浓度山梨醇构建等渗环境，维持毕赤酵母原生质体细胞渗透压，保障破壁原生质体完成细胞壁再生；
Dextrose：葡萄糖作为培养基唯一碳源；
核心设计目的：以无氨基酸酵母氮源YNB为基底，固定添加5种基础氨基酸，仅通过调控组氨酸有无制造筛选压力，适配his4营养缺陷型毕赤酵母原生质转化体系，液体RD用于原生质体复苏再生与转化子选择性培养；添加琼脂制备RDB固体平板，实现毕赤阳性转化单克隆分离筛选。
1. 用900 mL无菌无菌去离子水（60168ES）溶解186 g山梨醇（60319ES），若配制固体培养基时加入20g琼脂（70101ES）。
2. 121°C高压蒸汽灭菌20min。
3. 置于45°C水浴锅中。
4. 用100 mL去离子水溶解以下RD培养基配方，并搅拌加热辅助至完全溶解。
RD培养基配方：20 g D-葡萄糖 （60902ES）、13.4g 不含氨基酸YNB(60901ES) 、0.005g L-谷氨酸（53667ES）、0.005g L-甲硫氨酸（55538ES）、0.005g L-赖氨酸（718734ES）、0.005g L-亮氨酸（55534ES）、0.005g L-异亮氨酸（718648ES）、0.4 mg D-生物素（60338ES）
注：可以提前配制500×生物素母液（200 mg/100 mL），每升培养基加0.05 mL母液替代直接称取微量粉末，减少误差。
5. 0.22 μm孔径滤器（84309ES）过滤除菌。并在水浴中预热至45°C。
6. 混合上述两种溶液。如果培养his4菌株，加入10mL 0.4%组氨酸无菌溶液。
7. 4°C保存。
1. 山梨醇必须随水一起高压，不可过滤；葡萄糖高温易碳化，只能滤菌后低温添加。
2. 筛选转化子不加组氨酸，对照/扩培每升加10mL无菌组氨酸。
3. 仅毕赤原生质体实验，不可替代酿酒酵母SD培养基。
Q1: 为什么酵母转化后需要使用RD？
A1: 酵母在转化过程中通常会经历电击、酶解、化学试剂处理、渗透压变化等刺激，细胞可能处于应激状态，部分细胞壁结构受损，短时间内生长能力下降。RD 培养基可以提供适合恢复的营养和渗透压环境，帮助细胞：修复细胞壁、恢复代谢活性、降低转化应激损伤、提高存活率、促进转化子形成菌落。因此，RD的核心作用不是诱导表达，而是帮助转化后的细胞再生和恢复生长。
Q2: RD和MD培养基有什么区别
A2: RD培养基和MD培养基都以葡萄糖为主要碳源，但用途不同。RD培养基用于转化后恢复、细胞壁再生、提高成活率；MD培养基用于转化子筛选、基础培养、生长观察。
Q3: RD 是否具有筛选功能？
A3: RD 的核心功能是再生和恢复，不是强筛选培养基。部分实验体系中，RD 可配合特定筛选压力使用，但一般情况下，如果需要筛选阳性转化子，仍需要根据菌株和载体系统转接至对应的选择培养基，例如MD、SD、含抗生素培养基或其他筛选平板。
Q4: RD 培养基可以和抗生素一起使用吗？
A4:可以根据实验需要添加，但应确认抗生素是否适合对应酵母筛选体系。如果转化后细胞状态较弱，筛选压力过强可能影响恢复和菌落形成。因此是否在RD中加入抗生素、加入浓度多少，应结合实验体系优化。抗生素通常不建议高温高压灭菌，建议培养基冷却后无菌加入。
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产品货号 |
产品名称 |
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Yeast Nitrogen base 酵母氮源基础 |
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D(+)-Glucose,anhydrous D(+)-无水葡萄糖 |
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D-Sorbitol D-山梨醇 |
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D-Biotin D-生物素 |
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Agar琼脂粉 |
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L-Glutamic acid L-谷氨酸 |
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L-Methionine L-蛋氨酸/L-甲硫氨酸 |
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L-Lysine L-赖氨酸 |
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L-Leucine L-亮氨酸 |
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L-Isoleucine L-异亮氨酸 |
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Ammoniumsulphate,≥99.0%,AR硫酸铵,≥99.0%,AR |
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SterileDeionizedWater(PCRGrade)无菌去离子水(PCR级) |
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DistilledWater蒸馏水 |
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针头式过滤器，0.22µm，PES，25mm，灭菌 |
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培养基全称 |
适用菌株/实验场景 |
培养基制备方案 |
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Synthetic Dropout Medium 合成缺陷培养基（SD） |
酵母单/双杂交实验、基因互补实验，用于单质粒转化验证、共转化验证、蛋白互作功能初筛等 |
SD培养基配制方案 |
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Regeneration Dextrose Medium 再生葡萄糖培养基（RD） |
毕赤酵母原生质体转化实验，用于原生质体复苏再生、转化子选择性培养、阳性转化单克隆分离筛选 |
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Minimal Dextrose Medium 最小葡萄糖基础培养基（MD） |
毕赤酵母表达菌株构建、转化子初筛、表型鉴定、菌株保藏，适配 GS115、X33 等多种常用毕赤酵母菌株 |
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Minimal Glycerol Medium 最小甘油基础培养基（MG/MGY） |
毕赤酵母重组菌株种子液活化与富集、诱导前菌体大量增殖，为后续蛋白诱导表达准备高活性菌体 |
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Minimal Methanol Medium 最小甲醇基础培养基（MM） |
毕赤酵母外源蛋白诱导表达、Mut表型鉴定、缺陷型菌株转化子筛选，适配多种常用毕赤酵母菌株 |
细菌培养相关专题详见官网：
