人T细胞激活实验方案
4
2026-06-11
实验准备
完全培养基配方供参考：RPMI-1640（41402ES，终浓度90%）胎牛血清（终浓度40132ES，10%）丙酮酸钠（60171ES，终浓度1x）L-谷氨酰胺（60757ES，终浓度1x）HEPES（60117ES，终浓度1x）青霉素-链霉素（60162ES，终浓度1x）β-巯基乙醇（52644ES，终浓度55μM）
实验步骤
一、抗体包被（实验前一天进行）
1. 将抗人CD3单克隆抗体(92674ES)稀释至PBS中，最终浓度为3 µg/mL。
2. 将稀释后的抗人CD3单克隆抗体按每孔1 mL加入24孔板（84013ES）中固定。
3. 在37°C、5% CO₂条件下孵育2小时，或在4°C下孵育过夜。
4. 从4℃取出包被好的培养板，弃去孔内的抗体溶液。
5. 用无菌PBS（41403ES）轻轻洗涤每个孔2-3次，以去除未结合的抗体。
二、细胞制备
1. 准备人外周血单个核细胞（PBMC）的单细胞悬液。对于T细胞激活，细胞应重悬于完全培养基中，浓度为(1-3)×10⁶Cells/mL。对于24孔板，推荐浓度为1×10⁶Cells/mL。
三、刺激培养
1. 在V型管中准备完全补充的T细胞培养基，向第二步中的细胞悬液中加入以下细胞因子和抗体：5 µg/mL抗人CD28单克隆抗体（
92674ES），10 ng/mL重组人IL-2蛋白（92674ES）
2. 将所需量的细胞转移到合适的细胞培养板中，最终密度为(1-1.5)×10⁶Cells/mL/cm²。
3. 在37°C、5% CO₂条件下孵育2天。
第四步：细胞计数
1. 培养2天后，检查细胞的健康状况并记录图像。
2. 以400×g离心细胞悬液5分钟，弃去上清液。用PBS洗涤细胞沉淀。
3.. 以400×g离心细胞悬液5分钟，弃去上清液。将细胞重悬于0.5mL 1%牛血清白蛋白（36101ES）中，计数细胞。检测细胞活性，要求活性>95%。
第五步：流式分析
激活标志物：CD69和CD25。
永利3044集团官网最新推出92674ES-Human T cell Activation Kit 人T细胞激活试剂盒（抗体包被法）黄金配比、高性价比、更省心更便捷。
该套装共包含3种试剂：
重组人IL-2：促进激活后T细胞的克隆扩增、维持活性与功能（如CD8⁺杀伤、CD4⁺辅助）
重组抗人CD3抗体：结合T细胞表面CD3/TCR复合物，启动T细胞激活的核心信号，替代抗原-MHC复合物刺激
重组人抗人CD28抗体：结合T细胞表面CD28，提供必需共刺激信号，避免T细胞失能（anergy），显著提升增殖与存活能力
相关产品推荐
|
产品分类 |
产品货号 |
产品名称 |
|
细胞因子类 |
92674ES |
Human T cell Activation Kit 人T细胞激活试剂盒（抗体包被法） |
|
细胞培养类 |
RPMI1640培养基（含L-谷氨酰胺；不含丙酮酸钠，HEPES，双抗） |
|
|
1× PBS 细胞培养级 |
||
|
Fetal Bovine Serum Gold Pro 胎牛血清（特级） |
||
|
Sodium Pyruvate (100 mM) 丙酮酸钠 (100 mM) |
||
|
L-Glutamine Solution(200 mM) L-谷氨酰胺溶液(200 mM) |
||
|
HEPES Free Acid (1 M) Buffer Solution, Cell Culture Grade HEPES溶液（1 M），细胞培养级 |
||
|
Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture 细胞培养用青霉素-链霉素（双抗） |
||
|
2-Mercaptoethanol-d6 2-巯基乙醇-d6 |
||
|
抗体类 |
PE Mouse Anti-Human CD69 mAb |
|
|
Anti-IL-2Ra / CD25 Reference Antibody (daclizumab) |
||
|
蛋白类 |
Bovine Serum Albumin(BSA),Standard Grade 牛血清白蛋白，标准级别 |
|
|
耗材类 |
96孔细胞培养板（TC处理) |
|
|
24孔细胞培养板（TC处理) |
||
|
60 mm细胞培养皿（TC处理） |
||
|
50mL离心管灭菌袋装 |
