Raw264.7诱导破骨细胞实验方案
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2026-06-11
一、破骨细胞前体细胞接种
1. 将生长状态良好的Raw 264.7细胞用含10%胎牛血清（40132ES）的α-MEM完全培养基重悬，并进行细胞计数。
2. 将细胞以2.5×10³cells/mL的密度，接种于已预先放置无菌盖玻片的24孔细胞培养板中，每孔加入1 mL细胞悬液。
3. 将培养板置于37°C、5% CO2的细胞培养箱中静置培养18小时，使细胞充分贴壁。
二、破骨细胞诱导分化
1. 细胞贴壁后（接种后约18小时），吸弃孔内旧培养基。
2. 更换为新鲜的破骨细胞诱导完全培养基。诱导培养基为含10% FBS的α-MEM培养基，并补充50 ng/mL重组小鼠M-CSF蛋白(91114ES)及100 ng/mL重组小鼠RANK L蛋白(95625ES)。
3. 此后，每3天更换一次诱导培养基。更换时，轻柔吸弃旧液，并加入等体积的、含有相同浓度M-CSF蛋白与RANK L蛋白的新鲜诱导培养基。
三、细胞形态学观察与鉴定
1.形态观察：自诱导开始，定期在倒置显微镜下观察细胞形态变化。通常，在RANK L诱导4天后，可观察到典型的多核破骨细胞样结构。
2.TRAP染色验证：RANK L诱导5天后，进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色以特异性鉴定破骨细胞。严格按照TRAP染色试剂盒的说明书步骤进行染色操作。
3.染色完成后，在光学显微镜下观察。成熟的破骨细胞胞浆呈红色或红紫色。
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重组小鼠RANKL:是驱动破骨细胞终末分化与融合的决定性信号，激活下游NFATc1等关键转录程序
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产品分类 |
产品货号 |
产品名称 |
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细胞因子类 |
Mouse Osteoclast Cell Differentiation Cytokine Set 小鼠破骨细胞分化细胞因子套装 |
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HiActi® Recombinant Mouse M-CSF Protein,His Tag 重组小鼠巨噬细胞集落刺激因子 |
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Recombinant Mouse RANKL/TNFSF11/CD254 Protein,His Tag 重组小鼠核因子-κB 受体激活因子配体 |
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细胞培养类 |
1× PBS 细胞培养级 |
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Fetal Bovine Serum Gold Pro 胎牛血清（特级） |
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Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell Culture 细胞培养用青霉素-链霉素（双抗） |
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耗材类 |
6孔细胞培养板(TC处理) |
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24孔细胞培养板（TC处理) |
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100 mm细胞培养皿（TC处理） |
