THP-1细胞诱导M1/M2型巨噬细胞实验方案
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2026-06-11
实验原理
THP-1细胞为悬浮生长的人单核细胞系，PMA可激活蛋白激酶C（PKC）信号通路，促使其周期停滞、表达黏附分子，分化为贴壁生长的M0型巨噬细胞（具备巨噬细胞基础表型与功能）。后续通过不同细胞因子微环境调控极化方向：LPS（脂多糖）联合IFN-γ可激活NF-κB通路，诱导M0向促炎的M1型极化，高表达促炎因子与CD86等标志物；IL-4联合IL-13可激活JAK-STAT6通路，诱导向抗炎修复型M2极化，高表达抗炎因子与CD206等标志物。
实验步骤
一、THP-1细胞预处理与M0诱导
1.细胞准备：取出培养箱中的THP-1细胞，轻轻吹打均匀，取10 μL细胞悬液与10 μL台盼蓝混合，计数板计数，调整细胞密度至1×10⁶ cells/mL。
2.接种：将细胞悬液接种至6孔板（84011ES），每孔2 mL；
3.PMA诱导：加入PMA（50601ES）至终浓度100 ng/mL（也可根据细胞状态调整为50 ng/mL），轻轻晃动混匀。
4.培养：置于37℃、5% CO2培养箱中培养24–48 h。倒置显微镜观察细胞形态（贴壁、呈不规则形、胞体增大为M0诱导成功标志）。
5.静息：吸弃含PMA的培养基，PBS轻轻润洗3次（彻底去除残留PMA），更换新鲜完全培养基（无PMA），继续培养48h使细胞静息，稳定M0状态。
二、M1型巨噬细胞极化诱导
1.极化培养基配制：在完全培养基中加入LPS（60747ES）（终浓度100 ng/mL）与IFN-γ（91207ES）（20ng/mL）。
2.刺激培养：吸弃M0细胞的静息培养基，每孔加入2mL M1极化培养基，继续培养24-48h。
三、M2型巨噬细胞极化诱导
1.极化培养基配制：在完全培养基中加入IL-4（90105ES）与IL-13（90112ES），终浓度均为20ng/mL。
2.刺激培养：吸弃M0细胞的静息培养基，每孔加入2mL M2极化培养基，继续培养48h（保障抗炎表型稳定表达，胞质丰富、伪足特征明显）。
四、极化效果验证
1.形态学观察（倒置显微镜，40×和100×）
M1型：细胞体积紧凑，呈阿米巴样或不规则圆形，短丝状伪足丰富，胞质内溶酶体密集（嗜碱性增强），具备强吞噬与运动能力。
M2型：细胞体积更大，呈扁平多角形或椭圆形，板状伪足发达，胞质透明（内质网/高尔基体丰富），伪足数量少于M1，侧重组织修复相关形态特征。
2. 表型标志物检测（流式细胞术）
a.细胞收集：吸弃培养基，PBS（41403ES）润洗后，用细胞刮（84508ES）轻轻刮取贴壁细胞，1200rpm离心5min，收集细胞沉淀。
b.抗体染色：用PBS重悬细胞至1×106 cells/mL，取100μL加入流式管，分别加入CD86-PE（772553ES）、CD206-FITC（32220ES）抗体及对应同型对照，4℃避光孵育30min。
c.检测分析：PBS（41403ES）洗涤2次，离心弃上清后用300μL PBS重悬，流式细胞仪检测。M1型以CD86+高表达为特征，M2型以CD206+高表达为特征。
3. 功能因子验证（可选）
M1型：ELISA检测上清中TNF-α（97072ES）、IL-6（97068ES）、iNOS含量，或qPCR检测TNF-α、iNOS基因表达（均显著上调）。
M2型：ELISA检测上清中IL-10（97063ES）、TGF-β含量，或qPCR检测IL-10、Arg-1基因表达（均显著上调）。
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该套装共包含5种试剂：
重组人IL-13和重组人IL-4：协同作用，驱动细胞向M2表型极化
重组人IFN-γ和脂多糖（LPS）：启动M1极化的核心信号
佛波酯(PMA)：将THP-1单核细胞初步分化为未极化的M0型巨噬细胞
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产品分类 |
产品货号 |
产品名称 |
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细胞因子类 |
Human THP-1 Cell Polarization Induction Kit 人THP-1细胞诱导成巨噬细胞的细胞因子套装 |
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HiActi® Recombinant Human IL-13 Protein 重组人白介素-13 |
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HiActi® Recombinant Human IL-4 Protein 重组人白介素-4 |
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HiActi® Recombinant Human IFN-γ Protein 重组人干扰素-γ |
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LPS,from Escherichia coli O55:B5 脂多糖来源于大肠杆菌O55:B5 |
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PMA (TPA) 佛波肉荳蔻醋酸 |
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细胞培养类 |
RPMI1640培养基（含L-谷氨酰胺；不含丙酮酸钠，HEPES，双抗） |
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1× PBS 细胞培养级 |
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Penicillin-Streptomycin (100×), Suitable for Cell culture 细胞培养用青霉素-链霉素（双抗） |
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ELISA类 |
Human TNF-α ELISA Kit |
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Human IL-6 ELISA Kit |
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Human IL-10 ELISA Kit |
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抗体类 |
PE Mouse Anti-Human CD86 mAb |
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FITC Mouse Anti-Human CD206 |
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耗材类 |
6孔细胞培养板(TC处理) |
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细胞刮刀，刮刀宽1.8 cm，可转动刮头，灭菌 |
