非洲猪瘟筛查漏检率高？你的qPCR预混液可能选错了！
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2026-07-29
非洲猪瘟（African Swine Fever, ASF）自2018年传入我国以来，始终是养猪业的"头号杀手"。作为一种烈性、高度接触性传染病，非洲猪瘟病毒（ASFV）致死率高达100%，且目前尚无有效商品化疫苗。在"拔牙式清除"为主的防控策略下，早期、快速、准确的核酸检测成为猪场生物安全体系的核心防线。
很多人认为：qPCR预混液不就是Taq酶+dNTP+buffer吗？能用就行。但在非洲猪瘟检测的实际场景中，通用预混液存在一些难以回避的短板：
① 样本抑制物耐受不足
非洲猪瘟检测样本类型复杂：血液、组织、口鼻拭子、环境拭子、饲料、饮水……其中环境样本（如栏舍擦拭样、鞋底样、车辆表面样、泥水等）往往含有大量腐殖酸、血红素、重金属离子等PCR抑制物。
通用预混液的酶保护体系并非针对这类样本优化，很容易出现Ct值后移、扩增效率下降，甚至完全抑制，直接导致假阴性。
② 大DNA病毒扩增效率偏低
非洲猪瘟病毒是一种大型双链DNA病毒，基因组大小约170-190kb，G+C含量约39%。其基因组结构复杂，存在大量重复序列和发夹结构，对DNA聚合酶的持续合成能力要求更高。
通用预混液中的Taq酶多为常规野生型或简单突变体，面对ASFV这样的复杂模板，扩增效率和灵敏度往往达不到最优。
针对非洲猪瘟病毒上述检测痛点，永利3044集团官网通过酶的定向进化和预混体系优化，正式推出这款专为非洲猪瘟病毒检测的qPCR预混液，更好的匹配中、下游客户检测试剂盒升级迭代的需求。
依托永利3044集团官网 ZymeEditor™酶改造平台，研究人员基于 DNA 聚合酶的结构解析与多来源酶序列比对，通过定点诱变、随机突变定向筛选、压力测试及酶蛋白片段重组等多种技术手段，对 Taq DNA 聚合酶进行全方位定向改造，获得了一系列优势突变体。接着，团队借助 MTPS 高通量筛选技术，从热稳定性、亲和力、聚合活性、外切活性等多维度筛选后，针对直扩等终端应用场景，进一步拆解影响酶活性的关键因素，优化筛选压力，最终改造出抑制物耐受性较强、持续合成速度快的Taq DNA聚合酶。
针对该定向进化、改造的Taq DNA聚合酶，分子诊断试剂关键原料研发平台对荧光定量PCR反应体系进行优化，通过大量真实临床样本测试、市面上同类试剂对比，经过不断的体系优化、调整、验证，正式推出这款专为非洲猪瘟病毒检测的qPCR预混液，同时也可接受含非洲猪瘟病毒引物探针的成品试剂盒的定制合作。
✅️ 适配性——针对非洲猪瘟病毒核酸检测优化，尤其适配宏石、天隆荧光定量 PCR 仪
✅️ 灵敏度——上百例临床样本检测，检出率、灵敏度优于市面同类产品
✅️ 快速——20min即可出结果
✅️ 稳定性——预混引探37℃放置7天，反复冻融20次性能稳定
✅️ dUTP/UDG防污染体系——引入了dUTP/UDG防污染系统，可有效防止气溶胶污染
1、非洲猪瘟真实样本检测
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仪器 |
天隆 |
体系 |
25 μL总体系，其中模板5uL |
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模板 |
真实临床样本 |
模板浓度 |
检测Ct值如下 |
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引物探针 |
非洲猪瘟病毒引物探针 |
前处理 |
猪场磁珠法大规模提取的核酸 |
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扩增程序 |
95°C 10 sec；40 cycles (95°C 1sec；60°C 5 sec)--20min |
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图1. 45例非洲猪瘟临床样本检测扩增曲线
表1. 45例非洲猪瘟临床样本检测Ct值统计
结果：使用市面上同类针对非洲猪瘟病毒检测的qPCR预混液，同时检测45例临床样本，结果显示，永利3044集团官网16967检测非洲猪瘟病毒的检出率更高、荧光值更高、低浓度检出效果更好。
2、灵敏度检测
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仪器 |
天隆 |
体系 |
25 μL总体系，其中模板5uL |
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模板 |
真实临床样本 |
模板浓度 |
梯度稀释到检测限浓度 |
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引物探针 |
非洲猪瘟病毒引物探针 |
前处理 |
猪场磁珠法大规模提取的核酸 |
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扩增程序 |
95°C 10 sec；40 cycles (95°C 1sec；60°C 5 sec)--20min |
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表2 不同厂家qPCR预混液非洲猪瘟病毒检测灵敏度测试
结果：使用市面上同类针对非洲猪瘟病毒检测的qPCR预混液，同时检测两例梯度稀释到检测限浓度的非洲猪瘟病毒核酸，结果显示，永利3044集团官网16967检测非洲猪瘟病毒的灵敏度、Ct值比市面上同类产品略有优势。
3、稳定性测试
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仪器 |
天隆 |
体系 |
25 μL总体系，其中模板5uL |
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模板 |
非洲猪瘟病毒阳性对照 |
模板浓度 |
阳性对照、灵敏度浓度 |
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引物探针 |
非洲猪瘟病毒引物探针 |
前处理 |
磁珠法提取 |
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扩增程序 |
95°C 10 sec；40 cycles (95°C 1sec；60°C 5 sec)--20min |
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图2. 16967预混非洲猪瘟病毒引物探针在37℃放置7天稳定性测试
结果：将16967预混非洲猪瘟病毒引物探针在37℃放置7天，与-20℃正常保存的试剂，同时扩增非洲猪瘟病毒阳性对照、灵敏度浓度核酸、NTC，结果显示两者检测峰形、Ct值、检出率无显著差异，且热加速后没有非特异性扩增，产品全预混稳定性良好。
永利3044集团官网深耕酶原料领域多年，为IVD企业、第三方检验机构及科研院所提供高品质、高性价比的分子诊断PCR原料——从逆转录酶、RNase抑制剂、Taq DNA聚合酶、UDG/UNG酶、Taq酶抗体、dNTPs等单组份，到经过体系优化的qPCR/RT-qPCR预混液，以及各种定制化服务，覆盖诊断试剂开发全流程，适用于临床诊断、食品安全检测、动物疫病防控、公共卫生应急等各个领域。
我们致力于以性能优越、供应稳定的分子诊断酶原料，助力下游客户打造更精准、更高效的诊断方案，共同推动分子诊断行业向前发展。
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产品类型 |
产品功能 |
产品名称 |
货号 |
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前处理试剂 |
核酸释放剂 |
核酸释放剂V3 |
16964ES |
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磁珠法拭子样本病毒DNA/RNA提取试剂盒 |
MolPure® Magnetic Swab Viral DNA/RNA Kit |
18300ES |
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qPCR Mix |
快速、全预混、ASFV检测 |
Hieff Unicon® HiSens TaqMan Multiplex qPCR Mix (UDG plus) |
16967ES |
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直扩、全预混、低残留 |
Hieff Unicon® Robust Multiplex qPCR PreMix V1 (UDG Plus) |
16945ES |
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快速、全预混、低残留 |
Hieff Unicon® Universal Superfast qPCR Mix（One Tube） |
16924ES |
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全预混、低残留 |
Hieff Unicon® Pure Pro U+ qPCR Mix（One Tube） |
16713ES |
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高灵敏通用可冻干 |
Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix（UDG plus） |
11893ES |
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RT-qPCR Mix |
高灵敏、耐抑制 |
Hifair® Universal Advanced Multiplex One Step RT-qPCR Mix (UDG Plus) |
16930ES |
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高灵敏、快速 |
Hifair® C203P1 Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit（UDG Plus） |
16630ES |
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高浓度一管式 |
Hifair® Advanced One Step RT-qPCR Probe Mix（UDG Plus） |
16921ES |
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全预混通用 |
11899ES |
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通用快速可冻干 |
Hifair® Lyo-Ready I Multiplex One Step RT-qPCR Kit（UDG plus) |
16645ES |
