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本试剂盒采用比色法，通过测量反应生成的无机磷的量来计算肌酸激酶(CK)的活力。检测原理如下：肌酸激酶(CK)催化三磷酸腺苷(ATP)和肌酸反应，生成磷酸肌酸。磷酸肌酸会迅速水解为无机磷酸(Pi)，而此时三磷酸腺苷(ATP)和二磷酸腺苷(ADP)保持稳定。加入钼酸铵后，无机磷酸(Pi)与钼酸铵反应生成磷钼酸，随后磷钼酸被还原为钼蓝。通过比色法测定钼蓝的吸光度，可以定量分析生成的无机磷酸的量，从而计算出肌酸激酶的活力。
本产品使用快速简便、稳定性好，适用于检测动物血清/浆、组织等样本中的肌酸激酶(CK)活力，可测24例左右样本。

产品信息

组分信息

备注：

1）试剂三：临用时每支需加双蒸水2 mL。(粉剂量较少，可将其4000转/分，离心2分钟后使用)

2）试剂四：临用前每支加双蒸水6 mL。

3）试剂五：临用时每支加双蒸水2 mL。(配好后-25～-15℃以下可保存5天 )

4）试剂七：临用前每支加双蒸水60 mL，配成试剂七应用液。（可适当加热溶解，溶解后2～8℃保存 ）

5）试剂八：临用时每支加双蒸水20 mL，配成试剂八应用液。（溶解后2～8℃保存，颜色变深后弃用）

6）定磷剂的配制方法：试剂七应用液︰试剂八应用液︰双蒸水︰2.5 mol/L硫酸 = 1︰1︰2︰1。配好的定磷剂应为浅黄色，若无色则失效，若呈蓝色则为磷污染，定磷剂需现用现配，配好后2～8℃可保存48小时。

使用说明

1.仪器试剂准备

含660 nm波长的分光光度计、1 cm光径比色皿、37℃及45℃水浴锅或恒温箱、台式低速离心机、各种规格移液器、烧杯或试剂瓶（配定磷剂用，必须干净）、双蒸水、生理盐水（0.9%）、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂。

2.样本前处理

1)  血清/血浆

可直接使用。

2)  组织标本

准确称取待测组织的重量，按重量（g）：体积(mL)=1:9 的比例，加入生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，制备成10%的组织匀浆，2500转/分钟，离心10分钟，取上清液，再用生理盐水稀释成所需要的浓度。

3.最佳取样浓度摸索

1）血清/浆最佳取样浓度的摸索：

正常情况下血清/浆中的CK活力比较低，但是如果模型组的CK活力会明显增高，建议在批量实验前取模型组做个预试，如CK活力＞3.50 U/mL，则需要用生理盐水将该模型组血清稀释后检测。

2）组织匀浆最佳取样浓度的摸索：

建议先做三支不同浓度的测试管。例如测肌肉组织匀浆，取样浓度分别为1%、2%、5%，然后计算酶的浓度，选取酶的浓度在0.01～0.1 mg/mL（即：酶活力在0.35～3.50 U/mL）的样本浓度为最佳取样浓度，进行批量实验。若浓度太高，需将样品浓度稀释后再测试；若浓度太低，需将样品加大浓度后测试。

4.操作表

注：试剂配制好，需37℃预温5分钟，再进行测定。

5.计算公式

血清计算公式：CK活力（U/mL）= 根据标准曲线计算获得的CK酶活力（U/mL）× N = [7.4491×(A测定-A对照)-0.0716]×N

其中，N表示样本测试前稀释倍数。

组织计算公式：CK活力（U/mgprot） = 根据标准曲线计算获得的CK酶活力（U/mL）÷ Cpr = [7.4491×(A测定- A对照) -0.0716] ÷Cpr

其中，Cpr 表示组织样本匀浆蛋白浓度，单位为mgprot/mL（prot表示蛋白）。

[注]：试剂盒中无CK标准品，可直接套用如上公式，但一定要注意，测定的绝对OD值一般需控制在0.05～0.5之间。

6.用简便操作法

1）配制混合试剂：

按试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五 = 8：2：5：10：5 的比例进行配制，用多少配多少，现用现配。

[注]：试剂配制好，需37℃预温5分钟，再进行测定。

2～8℃保存，有效期3个月。