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新品上市|用于高通量筛选的焦磷酸(PPi)荧光检测试剂盒

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2022-10-25

一些生物反应能够产生焦磷酸盐，如ATP水解、DNA和RNA聚合、环AMP形成和脂肪酸的酶促活化以形成它们的CoA酯等酶促反应等。此外，在关节液、血浆以及尿液中有许多PPi来防止钙化，且在细胞外液(ECF)中能够抑制羟基磷灰石的形成，因此，在骨代谢、肾结石疾病和某些类型的关节炎的研究中，血浆、血清及生物液体中的PPi含量是一个非常重要的研究指标。

永利3044集团官网新品50115 焦磷酸(PPi)荧光检测试剂盒

该试剂盒使用独特的PPi荧光感受器(Ex/Em=316/456 nm)，与PPi直接结合，其荧光强度与焦磷酸盐浓度成正比。与至少需要两种酶的酶偶联焦磷酸盐（比色法）检测方法相比，荧光法检测更容易、特异性更强、更可靠，是筛选酶活性或酶抑制剂的理想方法。已成功用于高通量筛选(HTS)，适用于多种样本，如：尿液、血清、血浆、细胞培养提取物、组织裂解物等。

产品特点

1.操作快速简单

2.PPi高灵敏性

检测灵敏度：浓度即使低于1 µM的焦磷酸盐能在10 min孵育后检测出。

图1.PPi standard curve

3.适用范围广

已成功用于高通量筛选(HTS)，适用于多种样本，如：尿液、血清、血浆、细胞培养提取物、组织裂解物等！

FAQ

Q1：探针只与PPi结合吗？

A：探针会和一些其它物质结合，如ATP或一些和PPi结构相近的，但亲和力不强。所以在选择配置样本的buffer要谨慎选择，建议一般是HEPES溶液。

Q2：如果缓冲液中有大于2 mM的MgCl2，抑制的是哪部分反应？

A：Mg2+会抑制PPi和探针的结合。

Q3：如何保证实验器具和试剂不含PPi？

A：实验器具清洗干净就可以，或者使用一次性实验器具。

Q4：如果样本体系中本身含有大于1 mM DTT和大于2 mM的MgCl2，可以将体系稀释后再进行检测吗？

A：体系可以稀释，但是同时要注意谨慎选择稀释液，并且稀释后样本中PPi浓度不要太低，要在检测范围之内。

Q5：血浆和血清都可以检测吗？

A：血清和血浆都可以用，但血浆中含有EDTA，如果EDTA> 30 μM会影响探针和PPi结合效率。

Q6：RIPA裂解液提取的样本能用这个试剂盒吗？

A：SDS、Tween-20和EDTA (> 30 μM)都会影响探针和PPi结合，而RIPA裂解液中含有SDS，故不适合。

Q7：样本裂解液中TritonX-100的浓度多少合适？

A：TritonX-100的浓度可以达到1%。

Q8：细胞和组织样本如何处理？

A：可以使用HEPES溶液或者HBSS进行匀浆，离心后取上清进行检测。细胞样本也可以使用温和裂解液，但裂解液中不能含有SDS、Tween-20或其它影响探针和PPi结合的物质。

Q9：试剂盒PPi的检测范围是多少？

A：0.1-10 μM。

Q10：为什么做出来的标曲和说明书上的不一样？

A：实验室需做复孔，注意复孔数据是否一致，去除差异大的数据；作图时横坐标取PPi浓度的log10值；

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