永利3044(中国集团)有限公司官网

本试剂盒基于酸性磷酸酶（ACP）分解磷酸苯二钠，产生游离酚和磷酸，生成的酚在碱性溶液中与4-氨基安替吡啉反应，经铁氰化钾氧化后生成红色醌衍生物。该红色物质在520 nm处有特征吸收峰，通过测定其吸光度，可定量检测样本中的碱性磷酸酶活力。

本产品适用于检测动物血清/浆、组织、各种体液、培养细胞以及细胞培养上清液等的酸性磷酸酶（ACP）活力。

产品信息

组分信息

备注：0.1 mg/mL 酚标准应用液配制方法：1.1 mg/mL酚标准贮备液﹕蒸馏水=1﹕10 稀释，现用现配。

建议60424ES-B基质液放于-25～-15℃保存。

使用说明

1.仪器试剂准备

含490～530 nm 波长的酶标仪、96孔板、37℃水浴锅或恒温箱、台式低速离心机、移液器、蒸馏水、生理盐水（0.9%）或PBS（0.1 M）、涡旋混匀器、试管或离心管、蛋白测定试剂盒（组织及细胞样本用）。

2.样本采集与保存

按常规方法采集样本，样本可以是血清/浆（肝素抗凝为佳）、细胞培养上清、组织或培养细胞。如样本收集后不能及时检测，请将样本放置于-25～-15℃或更低温度保存。

3.样本前处理

1）血清/血浆

解冻后可直接使用，个别含量过高的的样本需稀释后测定，如鸡血清需要用生理盐水5-10倍稀释。

2）细胞培养液

将培养液吸出，加入到离心管中，2000-4000转/分钟，离心5分钟后取上清待测。

3）组织样本

准确称取待测组织的重量，按重量（g）：体积(mL) = 1:9的比例，加入9倍体积的生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500 转/分钟，离心10分钟，取匀浆上清液待测，匀浆上清液需要测定其蛋白浓度。

4）细胞样本

① 悬浮培养细胞：可直接通过离心收集沉淀细胞（1000转/分钟，离心10分钟，弃上清留沉淀细胞）。

② 贴壁培养的细胞：吸去上清，可通过细胞刮直接将细胞刮下；或者是用0.25%的胰酶室温消化2～3分钟，加培养液终止消化，用微量移液器轻轻吹打，将所有液体吸出转入EP管，然后1000转/分钟，离心10分钟弃上清，留沉淀细胞，再加入1 mL PBS轻轻吹打，再次1000 转/分钟，离心10分钟弃上清，留沉淀细胞待用。如暂时不做，则可以将细胞沉淀物低温冻存，温度越低越好。

③ 培养细胞的破碎：

a.研磨破碎：在细胞沉淀中加入一定量（106的细胞一般加0.3～0.5 mL）的缓冲液（缓冲液可以用PBS或者是生理盐水），用手动玻璃匀浆器冰水浴研磨3～5分钟，或者是用卡富隆电动研磨器冰水浴研磨3分钟待测。

b.超声破碎：在细胞沉淀中加入一定量（106的细胞一般加0.3～0.5 mL）的缓冲液（缓冲液可以用PBS或者是生理盐水），需保证超声探头在液面以下。功率300W，冰水浴，每3～5秒超声一次，间隔4次，每次间隔时间为30秒左右。

c.化学裂解：贴壁培养的细胞，可直接将上清吸去后，直接在孔板或是瓶中加入一定量的裂解液（覆盖满细胞），裂解30～40分钟（可用显微镜观察细胞破碎情况），再用微量移液器吸出待测，根据需要可用生理盐水或PBS进行一定的稀释。

④ 破碎好的细胞2500转/分钟，离心10分钟，取上清液待测。

4.操作表

5.计算公式

1）液体样本计算方式：（适用于培养液、血清、血浆等液体样本的计算）

定义：100 mL血清或液体在37℃与基质作用30分钟产生1 mg酚为1个金氏单位。

计算公式：液体样本ACP活力（金氏单位/100 mL）=(A测定−A空白)/(A标准−A空白)×C标准×100×N

其中，A测定：表示测定孔的吸光度值；A空白：表示空白孔的吸光度值；A标准：表示标准孔的吸光度值；C标准：表示酚标准液浓度，单位为0.1 mg/mL；N：表示样本测试前的稀释倍数。

b.组织计算公式：（适用于培养细胞、组织等相关样本的计算）

定义：每克组织蛋白在37℃与基质作用30分钟产生1 mg 酚为1个金氏单位。

计算公式：组织、细胞样本ACP活力（金氏单位/gprot）=(A测定−A空白)/(A标准−A空白)×C标准÷Cpr​

其中，A测定：表示测定孔的吸光度值；A空白：表示空白孔的吸光度值；A标准：表示标准孔的吸光度值；C标准：表示酚标准液浓度，0.1 mg/mL；Cpr：表示样本蛋白浓度，单位为gprot/mL（prot指蛋白）。

2～8℃避光保存，有效期6个月。