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随着医疗行业的蓬勃发展，类器官/干细胞培养的热度不断攀升，胃类器官也是类器官培养中比较受关注的一类。体外培养的胃类器官含有多种细胞克隆亚群，常衍生于胃干细胞或者多能诱导干细胞（iPSC），其培养环境模拟体内的微环境，因此胃类器官在细胞组分、空间结构和生物功能等方面与胃上皮组织高度类似，为人类胃的生理与疾病的研究提供了一个有利的平台和工具 。

胃类器官的培养较为繁琐，胃上皮腺体可分为胃底腺（Fundus）和胃窦腺（Antrum）两部分，均可用来构建胃上皮类器官。根据来源不同，胃类器官培养主要分为两种体系：

成体干细胞来源：从胃活检组织分离Lgr5+干细胞培养

多能干细胞来源：从iPSC或ESC定向分化获得 

胃上皮类器官培养的原理是在3D条件下培养胃上皮干细胞，需要加入小分子化合物和生长因子来刺激干细胞分裂、分化并形成球囊状结构。

 图1 多能干细胞分离的胚层成分可用于组织工程以生成复杂的人体胃类器官^[1]

一．胃类器官的建立（从原代组织）

1. 将新鲜胃组织置于预冷的无菌PBS（Cat# 41403ES）（含1% BSA）中，用无菌镊子轻轻清洗3次，去除血液和杂质。

2. 在无菌培养皿中，用无菌手术剪刀将组织剪碎至1-3mm2大小。使用含EDTA的冷螯合缓冲液孵育，震荡或吹打使胃腺从组织中释放出来。沉淀后弃去上清液。小心收集收集分离的胃腺用于后续培养。

3. 将分离的胃腺重悬于融化的基质胶，并用预冷的移液器枪头将其分装至24 孔板，每孔加入50 μL的胃细胞/基质胶混合物；

4. 将培养板置于37°C、5% CO₂孵育箱中15-25分钟，待基质胶完全凝固；

5. 沿孔壁缓慢加入500 μL预热的含10 μM Y-27632（Cat# 53006ES）或Y-27632 dihydrochloride（Cat# 52604ES）的胃类器官培养基（Advanced DMEM/F-12, EGF, FGF-10, Wnt-3a, B-27, N-2, R-Spondin 1, Noggin, A 83-01, 胰岛素，SB 202190，CHIR-99021, Gastrin I，N-乙酰半胱氨酸，烟酰胺，谷氨酰胺）；

6. 37°C、5% CO₂孵育箱中培养，24小时后更换为不含Y-27632（Cat# 53006ES）或Y-27632 dihydrochloride（Cat# 52604ES）的培养基。每2-3天换液一次。

图2 从人胃腺体中生长的类器官^[2]

二. 胃类器官的传代

1. 在显微镜下观察胃类器官的生长情况，24孔板中每孔可含有500-1000个类器官。

2. 将含有胃类器官的24孔板从细胞培养板转移至锥形瓶中。

3. 500g离心3分钟，沉淀胃类器官。从管的底部吸取培养基消化提取。

4. 用血清移液管轻轻吹打2-3次，将锥形瓶放入37度水浴中，孵育10-15分钟，消化提取物。

5. 锥形瓶中加入适量的FBS，终止消化。

6. 用血清移液管轻轻吹打2-3次后，对类器官进行过滤，分离。

7. 500g离心3分钟，沉淀胃类器官，弃上清。

8. 用培养基重悬类器官，并加入24孔板中，将培养板放入细胞培养箱内，孵育25-30分钟。

9. 在24孔板中加入适量的传代培养基，并置于细胞培养中继续培养。

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[1] Eicher A K ,  Kechele D O ,  Sundaram N , et al. Functional human gastrointestinal organoids can be engineered from three primary germ layers derived separately from pluripotent stem cells - ScienceDirect.  2021.

[2] Sina Bartfeld,et al. In vitro expansion of human gastric epithelial stem cells and their responses to bacterial infection. Gastroenterology. 2015 Jan;148(1):126 - 136.e6.

 （本文中的实验方案基于已发表文献优化整理，内容仅供参考，实际实验条件可能因细胞系差异、实验室环境等因素需调整，建议用户在正式实验前进行预实验优化。）