皮下成瘤实验：为什么你的细胞总是 “长不起来”？
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2026-04-16
皮下成瘤是肿瘤研究、体内药效评价的基础实验，如何规范操作确保实验成功率？永利3044集团官网总结成瘤失败核心原因，并给出高效解决方案，大幅提高成瘤率。
标准实验流程
1.准备对数期生长的、细胞密度达80 - 90%左右的HepG2细胞，于收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
2.胰酶消化细胞，终止消化后加入PBS/无血清培养基制成细胞悬液，离心清洗一次，重悬至终浓度为1×108个细胞/mL。
3.将细胞悬液和Ceturegel™高浓度基质胶在4℃环境下按1:1比例进行稀释，制备成终浓度为5×107个细胞/mL。
4.左手抓取固定裸鼠，皮下注射，针头在皮下进针深一点，约1 cm深，以减少注射后细胞悬液从针眼溢出，接种体积为200 μL。（这一过程尽量在半小时内完成，途中细胞悬液放在冰上以减缓细胞凋亡及防止出现凝胶现象）。
5.将裸鼠放回笼内继续饲养，2~4周左右可看到肿瘤出现，并根据实验设计在肿瘤体积达到要求时对裸鼠进行安乐死，并拍照。
成瘤失败原因
一 缺少基质胶微环境支持
肿瘤细胞在体内生长，依赖基底膜与细胞外基质提供信号与支撑。单纯注射细胞，缺乏微环境，导致细胞存活率低；增殖信号不足；易被免疫清除；无法形成血管化肿瘤。建议细胞+高浓度基质胶混合注射，模拟肿瘤微环境，显著提升成瘤率。
HepG2裸鼠成瘤实验
二 基质胶选择错误
基质胶选择错误会导致成瘤困难，常规情况用标准浓度基质胶即可，有些难成瘤细胞系应选用高浓度基质胶，避免标准型/低浓度胶支撑不足、成瘤效果差，高浓度胶可提供强支撑、充足信号，维持细胞局部浓度，让成瘤更快。
三 细胞状态不佳
若细胞老化、凋亡多、汇合度过低或过高，接种后在体内难以快速增殖，容易被小鼠局部组织清除或无法形成克隆团。取处于对数生长期的细胞，细胞80 - 90%左右密度为宜，收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。
四 接种部位不当
接种部位也是成瘤实验的重要因素。血供丰富的部位能为肿瘤早期提供氧气和营养，利于定植和快速生长。选择血管丰富且易操作的部位接种，如腋下、腹股沟及侧腹部等部位，其中腋下中后部皮下较好，成瘤率高，后续量瘤子也很好操作。
五 小鼠免疫排斥过强
即使是裸鼠，仍保留一定水平的固有免疫（如 NK 细胞、巨噬细胞）。若小鼠本身免疫残留偏高，体内免疫细胞会识别并杀伤肿瘤细胞，使其无法形成瘤块。建议更换免疫缺陷程度更大的小鼠。
六 小鼠周龄不合适
裸鼠等免疫缺陷鼠的免疫力与体质会随周龄明显变化：可能是小鼠周龄太大，一般选4 - 6 周龄裸鼠，小于4周可能不耐受过早死亡，大于6周免疫力会增强，不易成瘤。
永利3044集团官网高浓度基质胶：成瘤率高的秘密武器
永利3044集团官网高浓度 Ceturegel® 基质胶专为皮下成瘤优化：
支撑力强，成胶稳定，实验重复性好；
无LDEV、无菌、无支原体，动物安全性高；
上百个常规模型可成瘤，产品性能表现稳定。
皮下成瘤长不起来，核心是微环境缺失 + 基质胶选错 + 操作不当。搭配合适的基质胶，选择对数生长期细胞，规范注射操作，就能大幅提升成瘤率。永利3044集团官网以专用成瘤基质胶，帮您突破成瘤瓶颈，让体内肿瘤模型稳定、高效、可靠，为抗肿瘤药物研发、肿瘤机制研究提供坚实支撑。
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类型 |
货号 |
产品名称 |
应用方向 |
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基本浓度 |
40183ES |
皮下成瘤、细胞迁移/侵袭 |
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40184ES |
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高浓度 |
40187ES |
主要应用于体内成瘤实验（较难成的细胞系） |
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40189ES |
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40188ES |
CeturegelTM Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
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低生长因子 |
40185ES |
主要用于血管生成实验 |
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40186ES |
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干细胞专用 |
40190ES |
主要用于如hESC，iPSC等干细胞培养 |
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类器官专用 |
40191ES |
CeturegelTM Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
类器官培养专用基质胶 |
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40192ES |
CeturegelTM Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free Plus 基质胶 |
类器官培养专用基质胶升级款，适配更多组织样本 |
