离心柱法 | 大肠杆菌DNA提取
13243
2026-03-09
实验所用试剂设备清单
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货号 |
产品名称 |
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MolPure® Blood/Cell/Tissue/Bacteria DNA fast Kit |
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RNase A 核糖核酸酶A（100 mg/mL） |
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— |
无水乙醇 |
实验前准备
1.需要自备乙醇，异丙醇，1×PBS，RNaseA。
2.开始实验前将需要的水浴先预热到70°C备用。
3. 第一次使用前请先在去蛋白液PL中加入指定量无水乙醇；漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入。
操作步骤
1. 取2mL 培养菌液，10000rpm，离心30s，尽可能的吸弃上清， 收集菌体。
2. 加入200 μL1×PBS重悬，10000rpm离心30s，吸弃上清。将细胞振荡或者吹打充分重悬于 180 μL1×PBS中。
3. 加入20 μL蛋白酶K溶液，充分混匀，再加入200 μL结合液BD，立刻涡旋振荡充分混匀，在 70°C 放置10min。 可选做步骤：如果RNA残留较多，需要去除RNA，可以在加入200 μL 结合液BD 前加5 μL 100 mg/mL RNaseA 溶液，振荡混匀，室温放置5-10min。
4. 冷却后加100 μL 异丙醇，立刻涡旋振荡充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀。
5. 将上一步混合物加入一个吸附柱AC中，13000rpm 离心1min，倒掉收集管中的废液。
6. 加入500 μL去蛋白液PL（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm 离心30s，弃废液。
7. 加入600 μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇），13,000rpm 离心30s，弃废液。
8. 重复步骤7一遍。
9. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm 离心2min，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇 抑制下游反应。
10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100 μL洗脱缓冲液EB， 室温放置3-5min，13,000rpm 离心1min。
11. DNA可以存放在-20°C，如果要长时间存放，可以放置在-70°C。
质检结果—DNA浓度和纯度
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样本序号 |
浓度（nanodrop）ng/μL |
A260/A280 |
A260/A230 |
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1 |
369.717 |
2.07 |
2.07 |
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2 |
391.245 |
2.08 |
2.10 |
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3 |
341.846 |
2.10 |
2.11 |
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4 |
382.898 |
2.05 |
2.03 |
质检结果—DNA完整度分析
数据来源：中国海洋大学
实验结论
采用永利3044集团官网离心柱法大肠杆菌细胞DNA提取试剂盒（18701ES）提取4个大肠杆菌样本，通过Nanodrop检测DNA的浓度和纯度、琼脂糖凝胶电泳检测DNA的完整度，结果显示：提取的DNA浓度满足预期要求、 、完整度好，无明显降解和拖带，满足后续实验需求。
