细胞侵袭│人源胶质母细胞瘤(U-251)细胞侵袭实验案例
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2026-04-02
实验所用产品：
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产品货号 |
产品名称 |
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40183ES |
一、Transwell小室基底膜制备
基质胶解冻与耗材预冷：
基质胶稀释与铺胶：
凝胶化：将铺胶后的小室置于37°C培养箱中，静置 0.5-4小时。凝胶完成后，取出24孔板，小心吸弃上室内残余的基质胶。
二、实验细胞准备
细胞给药处理：
细胞悬液制备：
三、细胞接种与共培养
建立趋化梯度：在24孔板的下室加入 600 μL 含 15% FBS 及双抗的完全培养基。
接种细胞：用镊子将铺好基质胶的Transwell小室置于孔中。每个小室接种 5×10⁴个细胞（即 200 μL 细胞悬液，不含血清），沿侧壁加入，轻轻敲击24孔板侧壁，使液面尽量平坦。
关键提示：确保小室底部膜与下室液体之间无气泡，否则会削弱趋化作用。
孵育培养：将培养板置于37°C、5% CO₂恒温培养箱中，培养 48小时（根据前期预实验结果确定）。
四、固定、染色与结果分析
固定：培养结束后，取出Transwell小室，弃去上室培养基。将小室轻柔置于新的24孔板中，用PBS清洗一次。
关键步骤：用PBS浸湿的棉签或棉花，非常轻柔地擦拭小室内残留的基质胶及未侵袭的细胞。
染色与漂洗：固定后，弃去固定液，用PBS室温静置清洗5分钟。加入 0.1% 结晶紫染色液，室温染色 30分钟。
观察与计数：将小室置于通风橱中风干，去除残余水迹。在显微镜下随机选取 4-5个视野 进行拍照。计数每个视野中穿过膜的细胞数。
实验结果：随着药物处理后，穿膜细胞数减少，表明该药物对U251细胞侵袭有抑制作用。
| 图1：空白对照组 | 图2：药物处理组 |
（数据来源：大庆油田总医院）
细胞侵袭实验小贴士
1.铺胶：基质胶铺制需全程冰上操作，枪头、离心管等耗材应提前预冷，以防胶体在操作过程中提前聚合，导致铺胶不均，影响屏障均一性。
2. 细胞：细胞需经充分无血清饥饿，以消除血清背景干扰。接种密度应通过预实验精确优化。
3. 气泡：组装小室与培养板时，务必检查并确保小室底部膜与下室含趋化剂的培养液之间无气泡。
4. 培养：侵袭培养时间因细胞类型而异，需通过预实验确定（通常12-48小时）。
5. 擦拭：用棉签擦拭上室未侵袭细胞时，动作必须轻柔、一致，且仅擦拭一次。
6. 计数：应在显微镜下随机选择至少5个不重叠的视野（避开膜边缘区域）进行计数，取平均值。
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