内质网

内质网是由一层单位膜围成的连续的网状膜系统，可分为糙面内质网（Rough Endoplasmic Reticulum，RER）和光面内质网（Smooth Endoplasmic Reticulum，SER）。

内质网染色的意义

1、观察内质网形态结构：

染色后可以在显微镜下清晰地观察到内质网的形态、大小、分布以及与其他细胞器的关系。这有助于深入了解内质网在不同细胞类型、不同生理状态下的结构特点，为研究内质网的功能提供基础。

2、疾病诊断

在某些疾病状态下，内质网的结构和功能会发生改变。通过内质网染色可以观察到这些变化，为疾病的诊断提供线索。例如，在一些神经退行性疾病、肝脏疾病和癌症中，内质网的形态和分布可能会出现异常。

3、病理机制研究：

有助于研究疾病发生发展的病理机制。例如，在一些内质网应激相关疾病中，内质网染色可以揭示内质网应激的程度和持续时间，以及内质网应激对细胞功能和存活的影响。

ER-Tracker介绍

ER-Tracker是一种用于标记和研究细胞内质网的荧光探针。它能够特异性地结合内质网，发出明亮的荧光信号，使研究人员能够在显微镜下清晰地观察内质网的形态、结构和动态变化。ER-Tracker广泛应用于细胞生物学、生物医学等领域，为研究内质网的功能和相关疾病提供了重要的工具。

应用原理

ER-Tracker通常是一种小分子荧光染料，其分子结构中含有能够与内质网特异性结合的基团。当ER-Tracker进入细胞后，会通过扩散或主动运输等方式进入内质网，并与内质网中的特定分子结合。这种结合是高度特异性的，使得ER-Tracker能够在细胞内选择性地标记内质网，而不与其他细胞器发生非特异性结合。不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

运输和保存方法

冰袋运输。≤-20℃避干燥保存，一年效期。避免反复冻融。

使用方法

使用前将ER-Tracker Blue-White DPX 回温至室温，并简短离心使该DMSO溶液至管底。
将1 mM ER-Tracker Blue-White DPX储存液按照实验要求稀释至工作浓度，推荐工作浓度 100 nM-1µM。建议在不影响实验结果的前提下尽量使用较低浓度探针，以避免由于浓度过高染色导致的假象。

注：使用含Ca2+、Mg2+ Hank’s 平衡盐溶液（HBSS/Ca/Mg）稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。

染色对于贴壁细胞，吸除培养皿中培养基，用HBSS清洗细胞，加入预热的染料工作液于37℃孵育细胞15-30 min。吸除染色液，加入不含探针的新鲜培养液，并在荧光显微镜下观察细胞。

注：由于ER-TrackerBlue-White DPX 探针具有较高光敏感性，会产生波动较大的发射吸收峰值，使用长通 DAPI 滤光片效果最理想。另，操作过程中需尽量避光。

常见问题

Q: 请问固定后的死细胞还能染上吗？

A: 该探针主要染的是活细胞的内质网，固定样本基本染不上色。

Q: 染色之后可以加抗荧光淬灭剂防止荧光淬灭吗？

A: 活细胞的染色，不需要加抗荧光淬灭封片液。

Q: 请问mito-tracker green 和 ER-traker red是同时染还是分开依次染，染完后荧光可持续多久（也就是在多长时间内还可以检测）？

A: 建议分开依次染色，荧光均存在淬灭的现象，染色完建议尽快检测，一般1小时内检测荧光强度基本变化不大。

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