上新 | LwaCas13a Nuclease，CRISPR RNA 检测工具酶
上新 | LwaCas13a Nuclease，CRISPR RNA 检测工具酶
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2026-10-14
RNA 作为遗传信息传递与基因表达调控的核心载体，参与多种生命活动，是病原体检测、转录组解析研究的关键靶标。随着相关研究与体外诊断场景不断发展，对 RNA 检测的灵敏度、特异性和检测时效提出更高要求。以 RT-qPCR 为代表的核酸扩增技术灵敏度突出，但依赖热循环仪器，样品前处理流程复杂，难以适配现场即时检测（POCT）；免疫层析抗原快检操作简便，然而灵敏度与特异性有限，无法兼顾检测性能与便捷性。[1,2]
针对上述研究难点，永利3044集团官网特推出 LwaCas13a Nuclease（14709ES）。该酶源自Leptotrichia wadei，经大肠杆菌重组表达获得，由 crRNA 引导，靶标激活后可非特异性降解单链 RNA，适用于 RNA 检测与靶向操作，具备两类核心活性：
crRNA 引导的靶向切割活性（cis-cleavage）：在靶标单链 RNA（ssRNA）存在合适 PFS（protospacer flanking site）序列的前提下，LwaCas13a 可在 crRNA 引导下特异性识别并切割靶标 ssRNA。[3]
靶标依赖的反式切割活性（trans / collateral cleavage）：当 LwaCas13a 与 crRNA、靶标 ssRNA 形成三元复合物后被激活，即可非特异性地切割体系中任意序列的单链 RNA，将靶标识别事件转化为可放大的信号。[4]
图1. LwaCas13a Nuclease 工作原理示意图[7]
基于上述特性，LwaCas13a Nuclease 可广泛应用于以下应用场景：
体外高灵敏度 RNA 检测：依托靶标激活的反式切割活性，LwaCas13a 可将分子识别信号转化为可放大的荧光或侧向层析信号。搭配恒温扩增技术，能够实现病毒 RNA、病原菌 RNA 及痕量转录本的阿摩尔（aM）级检测，是 SHERLOCK 等 CRISPR 核酸检测体系的关键工具酶。[1,2]
细胞内 RNA 靶向调控与敲低：LwaCas13a 可在哺乳动物、植物细胞中异源表达，靶向降解报告基因或内源转录本，完成基因表达敲低。[5]
体外 RNA 定点切割：可作为 RNA 定点切割工具，应用于 RNA 加工与体外分子操作实验。[6]
靶标依赖高效反式切割，保障 RNA 检测信号放大能力
图2. LwaCas13a Nuclease 反式切割活性验证
注：20 μL 反应体系，各组分终浓度 / 用量：1×Cas13a Reaction Buffer、50 nM crRNA、500 nM Cas13 ssRNA Reporter、5 ng/μL 转录 RNA、1 U/μL Murine RNase Inhibitor；LwaCas13a Nuclease 1 pmol（终浓度 50 nM），DEPC 水补足至 20 μL。设置阴性对照：①不加转录 RNA；②不加 crRNA。37℃反应并实时采集荧光。仅靶标 RNA 与 crRNA 共存的体系出现显著荧光信号，说明反式切割活性需要 crRNA 与靶标 ssRNA 共同激活。
三重核酸酶残留质控，降低杂酶干扰，实验重复性更优
图3. LwaCas13a Nuclease 核酸酶残留检测结果
注：以对照（C）与 LwaCas13a Nuclease 分别与相应核酸底物于 37℃ 孵育 4 h 后进行琼脂糖凝胶电泳检测，样品组电泳条带与对照一致，未见核酸内切酶、核酸外切酶及 RNase 残留引起的降解或拖尾。
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产品名称 |
产品货号 |
特性 |
典型应用 |
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14709ES |
crRNA 引导的 RNA 内切酶；靶标激活后具反式切割活性，可实现信号放大 |
体外高灵敏 RNA 检测、细胞内 RNA 靶向调控与敲低、体外 RNA 定点切割 |
为满足不同实验场景下的基因编辑与核酸检测需求，永利3044集团官网提供完整的 CRISPR/Cas 工具酶产品矩阵，适配基础基因编辑、低脱靶编辑、转录调控、恒温扩增与核酸检测等多元应用，一站式解决科研痛点。
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产品名称 |
产品货号 |
特性 |
典型应用 |
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14709ES |
RNA 引导的 RNA 内切酶，具靶标激活的反式切割活性 |
体外高灵敏 RNA 检测、细胞内 RNA 靶向调控与敲低、体外 RNA 定点切割 |
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14702ES |
野生型 Cas12a，靶向双链 DNA |
恒温扩增 / 核酸检测 |
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14808ES |
野生型 Cas12b，靶向双链 DNA |
恒温扩增 / 核酸检测 |
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14701ES |
野生型 SpCas9 |
基础基因编辑 |
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14704ES |
高保真 Cas9 |
低脱靶基因编辑 |
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14706ES |
切刻型 Cas9（D10A） |
单链切口编辑 |
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14705ES |
无剪切酶活性的 Cas9 |
转录调控 / 染色质免疫沉淀 |
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14707ES |
带 EGFP 标签的野生型 SpCas9 |
荧光示踪 / 流式分选富集 |
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14703ES |
AI设计高保真基因编辑 |
基础基因编辑 |
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11355ES |
Cas9 sgRNA 体外合成试剂盒 |
Cas9 sgRNA 制备 |
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14548ES |
切割错配 / 十字形 DNA |
基因编辑效率检测 |
[1] Gootenberg J S, Abudayyeh O O, Lee J W, et al. Nucleic acid detection with CRISPR-Cas13a/C2c2[J]. Science, 2017, 356(6336): 438-442.
[2] Myhrvold C, Freije C A, Gootenberg J S, et al. Field-deployable viral diagnostics using CRISPR-Cas13[J]. Science, 2018, 360(6387): 444-448.
[3] Abudayyeh O O, Gootenberg J S, Konermann S, et al. C2c2 is a single-component programmable RNA-guided RNA-targeting CRISPR effector[J]. Science, 2016, 353(6299): aaf5573.
[4] East-Seletsky A, O'Connell M R, Knight S C, et al. Two distinct RNase activities of CRISPR-C2c2 enable guide-RNA processing and RNA detection[J]. Nature, 2016, 538(7624): 270-273.
[5] Abudayyeh O O, Gootenberg J S, Essletzbichler P, et al. RNA targeting with CRISPR-Cas13[J]. Nature, 2017, 550(7675): 280-284.
[6] Cox D B T, Gootenberg J S, Abudayyeh O O, et al. RNA editing with CRISPR-Cas13[J]. Science, 2017, 358(6366): 1019-1027.
