RAW264.7细胞 M1/M2 巨噬细胞极化诱导试剂盒，标准化配比无需摸索
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2026-06-18
小鼠RAW264.7是小鼠腹腔单核巨噬永生化细胞系，通过 Abelson 鼠白血病病毒（A-MuLV）感染小鼠原代腹腔单核巨噬细胞构建，可无限传代、稳定增殖，是全球免疫领域使用最广泛的体外巨噬细胞模型。区别于原代骨髓 BMDM、肺泡 MH-S、腹腔原代巨噬，无需小鼠取材、不用诱导分化，复苏后直接培养即可获得成熟巨噬细胞，实验门槛低、重复性稳定。
图1.M1和M2型巨噬细胞的区别[1]
1. 无需小鼠解剖、不用 7 天诱导分化，省时省力，适合大批量筛选实验；
2. 对 LPS、各类重组细胞因子响应灵敏，M1/M2 分型差异明显，qPCR、流式结果区分度高；
3. 文献引用量最高，数据认可度高，适配硕博课题、SCI 文章、国自然基础实验；
4. 培养成本低、传代稳定，适合长期梯度摸索、重复验证实验。
1. 巨噬细胞 M1/M2 极化机制研究，细胞因子、小分子、天然产物调控筛选；
2. 天然免疫通路：NF-κB、NLRP3 炎症小体、TLR 信号体外模型；
3. 炎症疾病模型：脓毒症、代谢炎症、急性脏器损伤体外评价；
4. 肿瘤免疫：构建 TAM 肿瘤相关巨噬细胞模型，免疫检查点、抗肿瘤药物药效筛选；
5. 吞噬实验、纳米材料生物安全性、胞内微生物感染免疫研究；
6. 配套小鼠巨噬极化细胞因子套装标准验证细胞模型。
M1型促炎极化系统（经典活化）： IFN-γ + LPS， 定向诱导M1巨噬，高表达促炎因子，用于急性炎症、抗感染、抗肿瘤免疫研究。
M2型抗炎修复极化系统（替代活化）： IL-4 （可加IL13或者IL10） ，高效诱导M2巨噬，主打炎症抑制、组织修复、纤维化、肿瘤微环境方向研究。
完全匹配通用 RAW264.7 极化最优工作浓度：
M1：LPS 100 ng/mL + mIFN-γ 20 ng/mL，刺激 24 h
M2：mIL-4 20 ng/mL(可加IL13或者IL-10)，刺激24h 开箱复溶直接使用，省去梯度摸索、分装配比，大幅缩短实验周期。
全部重组蛋白采用原核高表达工艺，Tag-Free 天然活性片段； 细胞活性验证合格，RAW264.7 诱导后 M1/M2 分型清晰，标志物诱导倍数高，qPCR、流式、WB 数据区分度强； M1 iNOS、TNF-α、CD86 显著上调；M2 Arg1、Ym1、CD206 稳定高表达，极化阳性率可达 85% 以上。
所有组分严格放行：内毒素＜0.1 EU/μg，无杂蛋白残留； 避免普通细胞因子批次波动、本底炎症偏高导致实验重复性差，适合国自然、SCI、硕博课题长期重复验证。
各因子独立无菌冻干粉末； 复溶后按需分装冻存，有效保护细胞因子生物活性，减少浪费、降低实验成本。
附赠完整标准化操作方案、标志物鉴定参考、流式抗体搭配建议。
1.接种：6孔细胞培养板（84011ES），每孔2×105个细胞（细胞不宜过多，否则影响极化效果），37°C，5% CO₂培养24h，让其充分贴壁。
2.M1型诱导：将培养基更换为DMEM（41401ES）+2%FBS(40132ES)(减少血清中细胞因子的影响)，并加入重组小鼠IFN-γ（25 ng/mL）和LPS（100 ng/mL）,设置对照（仅细胞，不加诱导剂），37°C，5% CO₂培养24h。
3.流式检测流程：
①收集细胞：细胞因子干预24h后，弃培养基上清，用PBS清洗细胞1遍，弃上清，再将贴壁细胞用PBS轻轻吹 打重悬，离心收集细胞。
②计数：用0.5ml的1%BSA重悬细胞，计算细胞总数，观察细胞活率，活率需达到95%以上。
③孵育抗体：加入PE Rat anti-Mouse CD86 mAb(抗体用量参考说明书）或者同型对照，室温孵育30min 。
④洗涤细胞：用PBS洗涤细胞，去除残留的抗体，并再次用PBS重悬。
⑤死活染料染色：每孔加入 Fixable Viability Kit (用量参考说明书），室温避光孵育15min。
⑥洗涤细胞：用1%BSA洗涤细胞，去除残留的抗体，用1%BSA重悬细胞。
⑦上机检测。
1.接种：6孔细胞培养板，每孔2×105个细胞（细胞不宜过多，否则影响极化效果），37°C，5% CO₂培养24h，让其充分贴壁。
2.M2型诱导：将培养基更换为DMEM+2%FBS(减少血清中细胞因子的影响)，并加入重组小鼠IL-4（20ng/mL）,设置对照（仅细胞，不加诱导剂），37°C，5% CO₂培养24h。
3.流式检测流程
①收集细胞：细胞因子干预24h后，弃培养基上清，用PBS清洗细胞1遍，弃上清，再将贴壁细胞用PBS轻轻吹 打重悬；离心收集细胞。
②计数：用0.5ml的1%BSA重悬细胞，计算细胞总数，观察细胞活力，需达到95%以上。
③死活染料染色：离心后用PBS重悬细胞至细胞密度为1*10^7/ml，100 μl/孔加至96孔板或流式管中，并加入Fixable Viability Kit(用量参考说明书），室温避光孵育15min，300Xg 离心5min，弃上清。
④固定：细胞用0.2mL 4%多聚甲醛重悬固定，室温避光放置15min，300Xg 离心5min，弃上清（去除残留的固定液）。
⑤破膜：细胞用0.2ml 1X破膜剂重悬破膜，室温避光放置30min，400Xg 离心5min，弃上清。
⑥洗涤细胞：每孔加入0.2ml 1X破膜剂重悬细胞，400Xg 离心5min，弃上清；
⑦封闭：每孔加入0.1ml 1X破膜剂，并加入2μg CD16/CD32 (771585ES60 )抗体进行封闭，冰上放置30min，400Xg 离心5min，弃上清。
⑧孵育抗体：每孔加入0.1ml 1X破膜剂，并加入APC anti-Mouse CD206 mAb (抗体用量参考说明书）或者同型对照APC Rat IgG Isotype Ctrl Antibody，室温孵育 30min，400Xg 离心5min，弃上清（去除残留的抗体）。
⑨洗涤细胞：每孔加入0.2ml 1%BSA洗涤细胞，400Xg 离心5min，弃上清，重复洗涤2次，用200μl 1%BSA
重悬细胞。
⑩上机检测。
图2. 流式分析数据（数据来源于重庆医科大学）
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产品分类 |
产品货号 |
产品名称 |
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细胞因子类 |
Mouse RAW264.7 Cell Polarization Induction Set 小鼠RAW264.7细胞诱导极化试剂盒 |
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细胞培养类 |
DMEM High Glucose Medium DMEM高糖培养基（含L-谷氨酰胺，丙酮酸钠110 mg/L；不含HEPES，双抗） |
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1× PBS 细胞培养级 |
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Red Blood Cell Lysis Buffer 红细胞裂解液 |
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Fetal Bovine Serum Gold Pro 胎牛血清（特级） |
*相关文献
1.Ernestina A , Marcarious M T , Rui Z , et al.Exploring the polarization of M1 and M2 macrophages in the context of skin diseases.Mol Biol Rep. 2024 Feb 1;51(1):269.
