细胞侵袭实验（Transwell）失败？手把手教你避坑
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2026-04-16
细胞侵袭实验（Transwell法）是研究肿瘤转移、细胞迁移及药物筛选的经典体外实验，原理简单但实操易“踩坑”——细胞穿膜少、分布不均、背景杂乱等问题频发，既浪费试剂时间，还延误实验进度。其实90%的失败都源于细节疏漏，本文将梳理全流程，帮你一次出有效数据，告别重复试错。
一、实验前准备：避开“源头性”错误，筑牢基础
实验失败多源于前期准备隐患，重点避开3个核心坑。
1.Transwell小室：常用孔径为8μm，具体需根据细胞大小优化；PET膜透明便于染色后直接观察计数，PC膜不透明但易于切割转移。新小室使用前用无血清培养基浸润 20–30 分钟，排出膜下气泡并湿润膜面，保证细胞良好贴附。吸净残留液体避免稀释细胞悬液。
2.基质胶需4℃过夜解冻，枪头提前预冷，滴加时避免触碰膜面产生气泡。培养基需形成趋化梯度：上室用无血清培养基，下室用10%-20%血清培养基；染色剂（如结晶紫）需提前过滤减少背景干扰，稀释至0.1%。
3.选用对数生长期细胞（传代24-48小时，贴壁融合度80%左右），建议传代次数≤15代；实验前血清饥饿12-24小时，接种前确认活细胞比例≥95%。
二、实验操作中：把控细节，避开“隐形杀手”
前期准备到位后，重点避开4个操作坑，避免功亏一篑。
1.气泡会阻断细胞与趋化因子接触：倾斜放入小室避免膜下气泡。
2.接种前充分吹打细胞悬液，枪头贴着小室内壁加样；加完后轻晃小室使细胞均匀铺展。
3.孵育时间按癌细胞侵袭能力调整，培养箱需维持90%以上湿度、5%±0.2% CO₂、37℃±0.5℃，避免基质胶干燥或培养基pH值波动。
4.用0.1%结晶紫染色15-30分钟，PBS清洗3次；擦拭上室未迁移细胞时，用湿润无菌棉签单向轻擦，避免戳破膜面或擦掉下表面细胞。
三、实验后结果分析：避开统计误区，确保数据可靠
设置空白对照、阳性对照，验证实验体系可靠性；实验至少3次独立重复。推荐使用ImageJ自动计数插件，
至少随机选取5个视野进行统计，结果需换算为侵袭细胞数/mm²。
四、常见失败场景速查：快速定位，高效解决
细胞不转移？
①细胞侵袭转移能力比较弱。
②基质胶浓度不佳铺的太厚，需要做预实验摸索。
③细胞量少，可尝试增加细胞数量。
④细胞没有用PBS洗1-2遍。用胰酶消化后，必须将含血清的培养基洗去。
⑤细胞的活性太差，活性不好的细胞做侵袭实验难度较大。
染色后细胞分布不均一？
①小室未平衡放置于孔板中。
②细胞悬液加入时局部过多。
③小室有倾斜或晃动。
④小室本身渗透膜不平。
五、永利3044集团官网产品介绍：一站式解决方案，助力实验成功
Transwell实验的成功，离不开优质耗材与试剂支撑。永利3044集团官网针对该实验推出全流程专用产品，降低失败率、提升数据可靠性。永利3044集团官网24孔Transwell小室，提供PET膜（84051ES）和PC膜（84052ES），经TC处理利于细胞贴附，辐照灭菌无杂质。配套Ceturegel® Matrix 基质胶，质地均匀、产品稳定，可灵活调整稀释比例；同时提供胰酶、胎牛血清、PBS、结晶紫等全套试剂，节省准备时间，助力科研工作者高效获得可靠数据。
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类型 |
货号 |
产品名称 |
应用方向 |
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基本浓度 |
40183ES |
皮下成瘤、细胞迁移/侵袭 |
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40184ES |
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高浓度 |
40187ES |
主要应用于体内成瘤实验（较难成的细胞系） |
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40189ES |
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40188ES |
CeturegelTM Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
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低生长因子 |
40185ES |
主要用于血管生成实验 |
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40186ES |
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干细胞专用 |
40190ES |
主要用于如hESC，iPSC等干细胞培养 |
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类器官专用 |
40191ES |
CeturegelTM Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基质胶 |
类器官培养专用基质胶 |
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40192ES |
CeturegelTM Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free Plus 基质胶 |
类器官培养专用基质胶升级款，适配更多组织样本 |
