胰蛋白酶（Trypsin）是一种普遍发现于脊椎动物消化系统的丝氨酸蛋白酶，能水解蛋白，以无活性的胰蛋白酶原（trypsinogen）的形式分泌于胰腺中。其切割肽链的位点主要位于赖氨酸或精氨酸的羧基端（二者紧接脯氨酸的情况除外）。胰蛋白酶包括两个亚基，α亚基（有2个多肽链构成）和β亚基（有1个多肽链构成）。其水解活性可被多种抑制剂抑制，包括：
1）有机磷化合物，如氟磷酸异丙酯；
2）来源于胰腺、大豆、青豆、蛋清的天然胰蛋白酶抑制剂；
3）银离子；4）特定蛋白酶抑制剂，如AEBSF、抗蛋白酶、抑肽酶、DFP、亮抑肽酶、PMSF、TLCK等；
本品是来源于猪胰腺的胰蛋白酶冻干粉，经γ射线处理灭活病毒，酶活≥ 250 units/mg。广泛用于细胞传代，将贴壁细胞从培养板上消化水解下来制备单细胞悬液，常用的工作浓度是0.25-5%（w/v）。
酶类产品选购指南：
| 产品形式 | 产品货号 | 产品名称 | 产品来源 | 产品优点 | 应用场景 |
| 液体 开瓶即用 省时省力 | 40123ES | 胰酶溶液（无酚红，含EDTA） | 猪胰脏 | 经典配方价格友好适用性广 | 大部分连续的强贴壁细胞系 |
| 40124ES | 胰酶溶液（无酚红，无EDTA） | ||||
| 40126ES | 胰酶溶液（含酚红，无EDTA） | ||||
| 40127ES | 胰酶溶液（含酚红，含EDTA） | ||||
| 40134ES | PerfCell Tryzyme™ Express酶，含酚红 | 无动物来源 | 温和解离，保持细胞活性室温稳定，使用更方便 | 需要确保细胞表面蛋白完整性的原代细胞等要求 | |
| 40135ES | PerfCell Tryzyme™ Express酶，无酚红 | ||||
| 40514ES | 重组胰蛋白酶消化液，无酚红 | ||||
| 40506ES | ACCUTASE细胞消化液 | 胰酶替代物，温和解离，无需清洗和中和 | 绝大多数原代细胞、哺乳动物细胞系以及昆虫细胞，尤其适合干细胞、原代细胞及细胞表面标记、病毒生长分析、流式细胞分析以及生物反应器相关检测实验要求场景 | ||
| 粉末 配制灵活 稳定性高 | 40101ES | 胰蛋白酶 | 猪胰脏 | 价格友好，适用性广 | 常规细胞培养传代和初生组织解离 |
| 20416ES | 重组胰蛋白酶（质谱级） | 毕赤酵母 | 高纯度β-trypsin＞80%，α-trypsin＜20%高活性>6800 USP units/mg无外源性病毒污染无糜蛋白酶等杂酶污染蛋白质组学酶解漏切率比进口产品低50% | 大部分连续的强贴壁细胞系20416ES具有不自切的特性，尤其适用于蛋白质分析，如蛋白质质谱、测序、肽图谱分析 | |
| 40512ES | 重组胰蛋白酶（药典级） | 大肠杆菌 | 高纯度β-trypsin≥70%，α-trypsin≤20%活性>3800 USP units/mg无外源性病毒污染无糜蛋白酶等杂酶污染 | ||
| 40507ES | Collagenase I 胶原酶I型 | 溶组织梭菌 | 含有比较均匀的各种酶活力（包括胶原酶，酪蛋白酶，梭菌蛋白酶，胰蛋白酶活性） | 通常用于上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备 | |
| 40508ES | Collagenase II 胶原酶II型 | 含有更高的梭菌蛋白酶活性 | 通常用于心脏、骨、肌肉、胸腺和软骨等组织来源细胞的制备 | ||
| 40509ES | Collagenase III 胶原酶III型 | 含有更高的梭菌蛋白酶活性 | 常用于乳腺细胞和胎儿细胞的制备 | ||
| 40510ES | Collagenase IV胶原酶IV型 | 含有低胰酶活性 | 通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验，干细胞消化优先选择，比分散酶更温和，对细胞损伤更小，适用于有饲养层培养和无饲养层培养进行的团块传代 | ||
| 40511ES | Collagenase V胶原酶V型 | 含有更高的胶原酶活性和酪蛋白酶活性，更低的胰酶水平以降低对细胞膜蛋白的损伤 | 适用于胰腺小岛细胞和结缔组织细胞的分离 | ||
| 40104ES | Dispase II 分散酶II | 细菌 | 快速有效且温和，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性，无支原体或其他动物病毒污染 | 可用于多种类型组织、原代细胞和类器官的分离等 | |
| 40516ES | Elastase, Lyophilized 弹性蛋白酶 | 猪胰腺 | 能够水解天然弹性蛋白，不被胰蛋白酶、糜蛋白酶或胃蛋白酶攻击 | 常用于解离含有大量细胞间纤维网络的组织，尤其适合II型肺细胞分离 | |
| 60373ES | Papain from papaya Latex 木瓜蛋白酶 | 番木瓜乳液 | 高比活性（≥15 units/mg protein），快速分解蛋白质肽键特异性，水解多种蛋白质和肽类反应条件温和，中性或弱酸性环境即可发挥作用室温稳定，使用更方便 | 常用于原代或神经元细胞解离，例如产后小鼠皮质神经元、平滑肌细胞（对兴奋刺激的敏感性不受影响）等、修饰红细胞表面、从IgG和IgM中制备抗体Fab片段、完整膜蛋白酶的溶解、从纯化的蛋白多糖内生产糖蛋白 |
注：无酚红款胰酶溶液更适合：流式细胞术（避免酚红干扰荧光信号）；激素相关研究（如乳腺癌细胞、子宫内膜细胞等对雌激素敏感的实验）；无血清培养或特殊培养系统（酚红可能干扰钠-钾平衡或培养基成分）。
| 中文别名（Chinese synonym） | 胰蛋白酶，猪胰脏来源； |
| 英文别名（English synonym） | Trypsin, porcine pancreas; Parenzyme; Tryptar; Trypure; Parenzymol; U-4858; |
| CAS号（CAS NO.） | 9002-07-7 |
| 分子量（Molecular weight） | 23.8 kDa |
| 外观（Apperance） | 白色至类白色粉末 |
| 消光系数（Extinction coefficient） | E1%280=14.3 |
| 等电点（Isoelectric Point） | pH 10.5 |
| 溶解性（Solubility） | 溶于水，几乎不溶于乙醇和甘油 |
| 比活力（Specific activity）* | ＞250 U/mg |
| *活力定义（Unit definition）：The activity causing a change in absorbance of 0.003/minute at 253 nm. | |
使用方法（用于贴壁细胞的消化）
1. 胰酶浓缩液（0.25%）的配置
称取0.25 g胰酶粉末溶于100 mL HBSS（无钙，镁）缓冲液，并调整pH在7.4-7.6范围。此时得到的即0.25%胰酶浓缩液，置于4℃短时间保存，3个月相对稳定。建议分装冻存，利于长期保存。解冻后可能会出现少量沉淀，属于正常现象，不会影响其使用效力。
【注】冻干粉也可溶于其他不含钙镁离子的平衡盐缓冲液如PBS。
细胞的消化可以直接用胰酶溶液，但通常使用的是胰酶-EDTA溶液，因为EDTA是一种II价金属离子螯合剂，能够螯合钙镁离子，减少细胞间的粘附性，从而增强胰酶的活性。
2. 胰酶-EDTA溶液的配制(0.25%(w/v))：
| 无Ca2+、Mg2+及酚红的平衡盐溶液 | To 500 mL |
| 胰蛋白酶 | 1.25 g |
| EDTA | 0.10 g |
3. 贴壁细胞的消化
方法一
1）移除培养板中的培养液，用不含Ca2+、Mg2+的缓冲液清洗单层贴壁细胞，直至清除残余血清，吸除盐溶液。
2）向上述贴壁细胞中加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液，至完全覆盖细胞即可。
3）倾斜培养板，吸取胰酶-EDTA溶液，反复吹洗细胞数次，注意消化时间不可过长。
【注】消化时间跟细胞类型、细胞密度、所用血清浓度、胰酶活性、以及消化前细胞培养时间有关。
4）将细胞于室温孵育直至细胞分离，期间可将细胞培养板置于显微镜下观察，避免细胞过度消化，从而避免胰酶对细胞造成的损伤。
5）加入10 mL细胞培养液，轻轻反复吹吸从而将细胞从培养板底尽可能吹离，吹洗时尽量避免气泡的产生。
6）进行下一步操作或将细胞冻存。
【注】操作时务必小心谨慎，同时时刻注意避免交叉污染发生的可能性。
方法二
以25 cm2 T-Flask为例，
1）无菌条件下吸除培养瓶中培养液。
2）加入3 mL冰的胰蛋白酶-EDTA溶液（配方同上）。
3）孵育30 s（或更长，如果需要）。置于低倍镜观察，如果有部分细胞开始变圆脱离培养瓶壁，此时可吸除胰酶溶液，继续孵育至细胞完全脱落。
4）加入10 mL新鲜MEM培养液，可用枪快速的将培养液加入，有助于使细胞脱落；然后使用相同的枪头，轻轻地多次吹洗细胞并混匀后，吸取其中5 mL于一个新的培养瓶中。
5）置培养条件下孵育。
冻干粉2~8℃干燥保存，有效期2年。
