本试剂盒采用双抗夹心酶联免疫分析法。将特异性抗人IDO抗体预包被于96孔微孔板中，依次加入人IDO标准品或待测样本，使标准品或样本中的人IDO蛋白与固相抗体特异性结合。随后加入生物素标记的抗人IDO检测抗体，洗去未结合物质后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素。再次彻底洗涤，加入TMB显色底物。TMB在HRP催化下转变为蓝色，加入终止液后颜色变为黄色，其颜色深度与样品中的人IDO蛋白含量呈正比。最后，使用酶标仪在450 nm波长处测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中IDO的浓度。

组分信息

【注】使用前请检查试剂盒中试剂的标签和数量与表格是否一致

操作简略程序：

1． 每孔加入标准工作缓冲液100 μL(按说明书梯度稀释)或样品100 μL，37℃孵育80 min。

2． 弃去酶标板中液体，每孔加入200 μL洗涤缓冲液，洗涤3次。拍干后，每孔加入100 μL生物素化抗体工作液，37°C孵育50 min。

3． 弃去酶标板中液体，每孔加入200 μL洗涤缓冲液，洗涤3次。 拍干后，每孔加入100 μL HRP酶工作液，37°C孵育50 min。

4． 弃去酶标板内液体，每孔加入200 μL洗涤缓冲液，洗涤5次。拍干后，每孔加入90 μL TMB, 37°C孵育20 min。

5． 加入50 μL终止液，450 nm立即读数。

标曲数据

数据拟合绘制标准曲线，生成的标曲用于实验数据分析。

试剂盒未拆封有效期6个月（4℃）；12 个月（-20℃）。拆封后按照条件保存，并在6个月内用完。避免污染与反复冻融，稀释成工作浓度试剂即用即弃，不可重复使用。