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CellROX Orange Reagent，一种用于检测活细胞内氧化应激的新型荧光探针，该探针可透过活细胞膜，且在还原态时无荧光，一旦进入细胞，被细胞内的活性氧(ROS)氧化后即可发出明亮橙黄色荧光，其最大吸收/发射波长分别为545/565 nm。

此外，CellROX Orange Reagent还具有一下优势：

1）可与GFP、CellEvent® Caspase 3/7 Green reagent, Image-iT® DEAD Green, Green and Deep Red MitoTracker® dyes, and NucBlue™ reagent等试剂连用，用于多色标记实验。

2）操作简单，细胞经药物处理后可直接将探针加入到含血清的培养基或其他buffer中。

3）可用于多种检测平台，如传统的荧光显微镜，高内涵筛选(HCS)、流式细胞仪以及Tali®成像型多色细胞分析仪等。

本品以溶于DMSO的溶液形式提供，浓度为2.5 mM，主要用于活细胞染色，不能用于后续甲醛固定以及透化处理。

1）本品对光和空气敏感，务必避光密闭保存。一旦开盖后，不建议继续使用没有用完的探针。

2）DMSO是有机溶剂，可渗透进入皮肤。请小心操作。

使用方法

【不同的实验条件，如细胞类型、培养基、细胞密度以及其他因素都有可能影响染色的效果，因此需要根据不同的实验目的使用不同的探针浓度。初次使用，建议设置浓度梯度以摸索最佳染色浓度。以下的操作条件仅作参考】

1）利用合适的药物或化合物处理细胞相应的时间；

【注】药物处理后无需去除培养基。

2）加入适量CellROX Orange Reagent，使其终浓度为5 µM，并于37℃孵育30 min；

3）吸除上述染色液，PBS洗涤3次；

4）利用荧光显微镜/流式细胞仪/HCS或者成像型多色细胞分析仪进行检测，其Ex/Em为545/565 nm。

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冰袋运输。-20℃避光、密封干燥保存，避免反复冻融，有效期6个月。

Q:这个细胞膜染料是否适用于植物细胞以及去除细胞壁的原生质体？

A:不推荐直接对植物物细胞染色。如想针对植物细胞进行染色，可以参考文献制备原生质体进行染色。